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[目的]PCV2(porcine circovirus 2)是引起猪圆环病毒相关性疾病(PCVAD)的主要病原,是养猪业重点防控疫病的病原之一.在众多防控PCV2 的措施中,疫苗接种是最重要的措施之一.PCV2 Cap 蛋白腺病毒载体疫苗已经有研究,但是免疫原性较差,本研究拟通过增加旱獭肝炎病毒转录后调控元件WPRE 以期提高其免疫原性.[方法]本研究构建表达PCV2 Cap 蛋白的腺病毒载体,并加入WPRE 对其进行优化,RT-PCR 和western blot 检测Cap 蛋白在重组腺病毒感染的HEK293A细胞中表达水平,进一步通过小鼠免疫试验检测重组腺病毒rAd-Cap 和rAd-Cap-WPRE 的免疫原性.[结果]以pUC57-A-C-W 为模板,用特异性引物进行PCR 扩增,成功得到两个目的基因,分别为579bp 和1164bp.目的基因与穿梭载体pShuttle-CMV 连接后,转化入DH5α,得到重组质粒,经PCR和双酶切鉴定为阳性,并测序,结果正确,分别命名为pShuttle-CMV-Cap 和pShuttle-CMV-Cap-WPRE.电转化入BJ5183 进行同源重组,成功构建重组腺病毒载体pAdeasy-ps-Cap 和pAdeasy-ps-Cap-WPRE.将重组腺病毒载体Pme I 线性化后转染进入HEK293A 细胞,出现细胞病变时收集细胞,RT-PCR 检测成功扩增出大小为579 bp 和1164 bp 片段的目的基因.两种重组腺病毒感染细胞24h 后,收集细胞,做western blot 分析,结果均能检测到Cap 蛋白,并且rAd-Cap-WPRE 比rAd-Cap 感染细胞Cap蛋白的表达水平高.将重组腺病毒免疫小鼠,进行iELISA 和淋巴细胞增殖实验,结果表明rAd-Cap-WPRE 免疫组的抗体水平和淋巴细胞增殖水平比rAd-Cap 免疫组要高.[结论]成功构建腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-Cap 和pShuttle-CMV-Cap-WPRE ； 成功构建重组腺病毒载体pAdeasy-ps-Cap 和pAdeasy-ps-Cap-WPRE；在HEK293A 细胞中成功包装,得到重组腺病毒rAd-Cap和rAd-Cap-WPRE；在体外,WPRE 元件可以提高腺病毒表达Cap 蛋白水平；在体内,WPRE 可以增强PCV2 Cap 腺病毒表达载体的免疫原性.