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目的:定量分析良、恶性肝病患者外周血NF-κB及MDR相关p-糖蛋白(P-gp)表达水平;以肝癌形成的动物模型,观察肝细胞恶性转化过程中NF-κB及p-gp动态表达规律;并以siRNA干扰NF-1κB基因转录或与阿霉素联合,观察NF-κB和P-gp变化、对肝癌细胞增殖抑制的协同作用,并分析肝癌MDR的形成机制.
方法:收集294份肝病患者和30份正常健康血液,以ELISA定量检测血NF-κB和P-gp浓度;以2-FAA制备肝癌模型,动态观察肝细胞恶性转化中NF-κB和P-gp表达;肝癌HepG2细胞,加入阿霉素、以siRNA下调NF-κB基因转录或/与药物联合,观察HepG2细胞增殖;以Western blotting检测蛋白,以荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析基因转录水平.
结果:从慢性肝炎、肝硬化到肝癌的发展进程中,NF-κB和P-gp呈进行性动态表达,肝癌组血NF-κB p65表达明显高于肝硬化组(P＜0.001)、慢性肝炎组(P＜ 0.001)及正常对照组(P＜0.001);肝癌组血P-gp表达明显高于肝硬化组(P＜0.005)、慢性肝炎组(P＜0.001)及正常对照组(P＜0.001);肝癌患者NF-κB p65和P-gp表达与患者性别、年龄、瘤体大小、AFP浓度间均未见明显差异;与HBV感染明显相关(P＜0.05);肝癌术后血NF-κB p65和P-gp表达显著下降(P＜0.001);肝癌介入化疗后两者表达呈正相关,随着化疗药物使用次数增多或时间延长而增加.肝癌模型研究显示,肝细胞恶性转化过程中NF-κB与P-gp呈进行性表达,与肝组织病理学改变显著相关;肝NF-κB比浓度(pg/mg肝组织);癌变组(P＜0.01)和癌前组(P＜0.01)浓度均显著高于对照组.肝P-gp比浓度(pg/mg肝组织);癌变组为268.29±25.62、癌前组为78.81±13.44、变性组为22.28±5.32和对照组为16.61±3.58,癌变组(P＜0.01)和癌前组(P＜0.01)浓度均显著高于对照组.NF-κB在人肝癌HepG2细胞过表达,显著高于LO2细胞;在p65 siRNA干预后,NF-κB在mRNA或蛋白水平均下降,呈p65 siRNA浓度和时间依赖性;p65 siRNA联合阿霉素作用于耐药HepG2细胞后,NF-κB p65和P-gp表达均明显减低,且明显抑制HepG2细胞的增殖,使耐药HepG2细胞对阿霉素更敏感.
结论:干预NF-κB活化,可抑制肝癌细胞增殖和P-gp表达、增强对抗癌药物的敏感性,提示干预NF-κB信号通路有助于逆转肝癌MDR.