【摘 要】
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目的 利用已制备的EGFR特异性单链抗体(s-9R)介导siRNA内化入NSCLC细胞抑制HER+肿瘤生长.方法 1、s-9R核酸携带、内化细胞能力鉴定：s-9R与FAM-siRNA室温混合30分钟后与细胞共孵育,利用激光共聚焦显微镜观察FAM-siRNA胞浆内分布,流式细胞检测肿瘤细胞荧光强度变化；2、HER2基因特异性沉默：s-9R/HER2 siRNA混合物与细胞共孵育,48小时后通过RT-
【机 构】
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第四军医大学第一附属医院西京医院呼吸内科
【出 处】
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2016中华医学会呼吸病学年会暨第十七次全国呼吸病学学术会议
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目的 利用已制备的EGFR特异性单链抗体(s-9R)介导siRNA内化入NSCLC细胞抑制HER+肿瘤生长.方法 1、s-9R核酸携带、内化细胞能力鉴定：s-9R与FAM-siRNA室温混合30分钟后与细胞共孵育,利用激光共聚焦显微镜观察FAM-siRNA胞浆内分布,流式细胞检测肿瘤细胞荧光强度变化；2、HER2基因特异性沉默：s-9R/HER2 siRNA混合物与细胞共孵育,48小时后通过RT-qPCR、westernblot检测基因沉默；3、流式细胞、平板克隆形成实验检测s-9R携带siRNA的生物学功能.结果 流式细胞术实验、激光共聚焦间接免疫荧光实验证实与BSA及scFv相比s-9R可以携带siRNA内化入NSCLC细胞.RT-qPCR、westernblot实验证实s-9R所携带siRNA可特异性沉默靶基因表达.流式细胞术、平板克隆形成实验证实s-9R/siRNA混合物可使NSCLC细胞细胞周期停滞与G1期,细胞增殖能力降低60％.结论 所获s-9R具有良好的生物学活性,可携带HER2siRNA特异性沉默HER2基因表达,抑制EGFR+/HER+肿瘤细胞在体外的生长.
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