论文部分内容阅读
目的:设计合成及筛选光老化相关基因—TGFβ1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)小分子干扰RNA(siRNA),了解基因调控效果.材料与方法:应用RNA设计软件,设计并合成针对小鼠TGF-β1mRNA的3对21核苷酸siRNA,转染小鼠成纤维细胞,检测转染效率及细胞活性;分别在基因和蛋白水平检测TGF-β1表达.结果:TGF-β1基因siRNA工作浓度为150nmol/L,Lipofectamine2000脂质体4ul/孔(24孔板)时转染率最高(84.0%).而同时考虑转染率与细胞活性,则要选用0.5ul/孔(转染率为72.4%).与对照组相比,转染TGF-β1 siRNA的小鼠皮肤成纤维细胞表达明显下调,以siRNA-S1最显著,基因水平抑制率达96.9%,蛋白水平抑制率达62.0%.结论:TGF-β1 siRNA转染小鼠成纤维细胞最佳条件是Lipofectamine2000脂质体0.5ul/孔,siRNA-S1有效抑制TGF-β1蛋白表达时间可达72h.