【摘 要】
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目的:在体外特异性沉默id-1后,结合热疗,检测该联合治疗是否能提高Tca8113细胞对热疗的敏感性,并探讨其机制。方法:构建慢病毒表达载体id-1-siRNA,将其转染至口腔鳞癌细胞系T
【机 构】
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口腔疾病研究国家重点实验室; 四川大学华西口腔医院头颈肿瘤外科; 青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院口腔科;
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目的:在体外特异性沉默id-1后,结合热疗,检测该联合治疗是否能提高Tca8113细胞对热疗的敏感性,并探讨其机制。方法:构建慢病毒表达载体id-1-siRNA,将其转染至口腔鳞癌细胞系Tca8113细胞,转染成功后给予恒温水浴加热。MTT比色法检测细胞存活率的变化,划痕实验检测细胞侵袭能力的变化,克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,Real-timePCR检测RNAi后目的基因mRNA的表达水平,Western Blot检测id-1及磷酸化AKT(p-Akt)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、磷酸化HSF1(p-HSF1)和Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果:id-1基因沉默联合热疗组的细胞增殖、侵袭和克隆形成能力均明显抑制(p<0.01);id-1的mRNA水平以及id-1、p-Akt、p-GSK3β、p-HSF1的蛋白表达水平均明显抑制,Bcl-2的蛋白表达水平明显升高(p<0.01);细胞凋亡明显增加(p<0.01)。结论:id-1基因沉默能够抑制AKT的磷酸化、提高GSK-3β的活性以及降低HSF-1的表达,id-1通过PI3K/AKT通路影响热疗的疗效,id-1基因沉默联合热疗能更加明显地抑制Tca8113细胞的生长。
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