应用化学合成siRNA抑制猪瘟病毒增殖的研究

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:voodoochildzm
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本研究针对猪瘟病毒三个基因,设计6个RNA干扰靶点,2个针对Npro基因、1个针对NS2基因和3个针对NS3基因。首先由公司合成以上干扰耙点的siRNA分子,将化学合成的siRNA分子转染PK-15细胞单层6 h,转染完成后接种猪瘟病毒石门株(96孔板200 TCID50/孔,12孔板2000 TCID50/孔),培养48 h和72 h,采用间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒感染滴度测定三种方法对siRNA分子抑制猪瘟病毒增殖水平进行了研究.间接免疫荧光结果显示转染siRNA分子的细胞荧光比例显著低于对照,72h荧光比例略高于48 h,其中NS3-1,NS3-2和NS3-3的荧光比例最少。转染各个siRNA分子(N8、N9、NS2-1、NS3-1.NS3-2和NS3-3)的细胞感染猪瘟病毒48 h后对猪瘟病毒基因组的抑制率分别为68.0%,71.1%、78.3%、85.5%、95.1%、84.7%:感染病毒72 h后抑制率分别为19.4%、61.3%、42.4%、77.3%、74.2%.60.1%,其中NS3-1和NS3-2高效抑制猪瘟病毒基因组的复制.转染组病毒感染滴度低于对照组,72 h病毒感染滴度高于48 h,其中NS3-1、NS3-2和NS3-3干扰组病毒滴度低于对照1-2个数量级。结果表明本研究筛选出的NS3-1和NS3-2靶点能高效抑制病毒增殖,为应用RNAi技术进行抗猪瘟病毒研究提供有效的候选靶点,为猪瘟病毒的防治进行基础性研究。
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