里氏木霉表达系统的改造及其应用

• 作 者: 黄亦钧;
• 机 构: 青岛蔚蓝生物集团有限公司
• 出 处: 第七届中国工业生物技术发展高峰论坛
• 发表日期: 2013年期

　　我国酶制剂行业利用工程菌生产工业酶的表达系统有：大肠杆菌表达系统,芽孢杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统等。这些商业化的蛋白表达系统受到国外公司的严格专利保护和限制；同时,蛋白质表达水平较低(表达量小于20g／l)、生产成本高,这也是限制行业发展的瓶颈之一。而丝状真菌表达系统如黑曲霉和木霉等,具有表达水平高(大于20g／l)、分泌表达和高密度发酵等优点而被国外酶制剂大公司广泛应用于工业酶的生产。本研究主要聚焦于木霉表达系统改造：(1)利用物理化学诱变,筛选多分枝突变体提高木霉宿主额总蛋白表达水平；(2)利用分子手段,敲除胞外的主要蛋白组分基因,如cbh1、cbh2、eg1和eg2等,去除杂蛋白,提高目的蛋白的表达水平。结果显示：(1)利用诱变方法筛选的多分枝菌株A3-82,其总蛋白量提高1倍；(2)通过敲除主要组分,使胞外目的蛋白含量提高到70％以上。