【摘 要】
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成纤维细胞(fibroblast)广泛存在于疏松结缔组织内,呈梭形或扁平的星状突起,是机体皮肤组织损伤后的主要修复细胞.在正常情况下其处于相对静止的状态,但在皮肤受到损伤和病变时,成纤维细胞将表现出增生活跃且代谢旺盛的特点.用以前的消化法分离得到的原代成纤维细胞纯度低,且易受到角质细胞的污染,不利于细胞的纯化和培养.我们最近成功确立了一种新的原代成纤维细胞分离方法,成功解决了以上问题.我们首先将人
【机 构】
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第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室,重庆400038
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成纤维细胞(fibroblast)广泛存在于疏松结缔组织内,呈梭形或扁平的星状突起,是机体皮肤组织损伤后的主要修复细胞.在正常情况下其处于相对静止的状态,但在皮肤受到损伤和病变时,成纤维细胞将表现出增生活跃且代谢旺盛的特点.用以前的消化法分离得到的原代成纤维细胞纯度低,且易受到角质细胞的污染,不利于细胞的纯化和培养.我们最近成功确立了一种新的原代成纤维细胞分离方法,成功解决了以上问题.我们首先将人包皮标本修剪后,用Dispase Ⅱ处理14h,分离出真皮层.然后将其剪碎,用0.5％胰酶消化液在37℃孵箱中消化10min,最后加入DMEM+10％FBS终止消化,并将细胞悬液用筛网过滤后,离心并去上清,将得到的细胞用PBS清洗2遍,800rpm离心10min,最后将细胞以1×106个接种至25cm2培养瓶中,24h后首次换液,去除未贴壁的细胞.结果发现与原消化法相比,这种方法得到的细胞贴壁率高,形态好、生长迅速,7天后可首次传代,且未见杂细胞污染.总的来说,这种方法简便高效,能在短时间内培养出大量原代成纤维细胞供实验或临床应用,在提高了工作效率的同时又降低了因细胞状态不好或杂细胞污染所带来的实验失败风险,所以这种新型的原代成纤维细胞分离方法值得进一步推广.
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