论文部分内容阅读
减毒沙门氏菌是粘膜免疫的理想载体，是目前最常用的减毒活疫苗载体之一。本实验以美国亚利桑那州立大学生物中心的Roy CurtissⅢ教授馈赠的大肠杆菌E·coliX6212为中间宿主菌，减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)X4550为终末宿主菌。采用四川大学生命科学学院动物疾病防控生物工程研究中心实验室保存的禽传染性支气管炎病毒SAIBK株为材料。用RT-PCR方法扩增禽传染性支气管炎病毒抗原基因S1，M，N;双酶切后定向克隆至真核质粒表达载体pv.AXl(符合2005年美国FDA对用于传染性疾病防控的DN。A疫苗载体的规定(G,uidance for Industry Considerations for PlasmidDNA Vaccines for Infectious DiseaseIndications，2005))，先转化中间宿主大肠杆菌E·coliX6212，获得阳性重组质粒pvAX-S1，pvAX-M，pVAX-N，再分别将其转化至终末宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella tyohimurium)X4550。通过对重组质粒双酶切和测序均正确。鉴定结果表明，成功构建了携带禽传染性支气管炎病毒pVA×1-S1，：pVA×1-M，pVA×1-N真核表达质粒的减毒沙门氏菌活载体疫苗。该活载体疫苗既有真核质粒表达载体pVAXl高效免疫效应优点，又有减毒沙门氏菌疫苗载体有效的定植作用，可以刺激宿主黏膜、体液及细胞免疫。有较好的双重免疫效果。