论文部分内容阅读
目的:Nob1基因是2005年克隆的一种锌带基因,其产物为转录相关锌带蛋白,具有类似转录因子的调节作用。我们前期实验制备了Nob1的单克隆抗体,并发现其在药物性耳聋豚鼠的螺旋神经节处呈强阳性表达。本实验通过研究噪声暴露前后大鼠耳蜗基因表达谱的变化,进一步明确该基因与耳聋的关系,为发现新的内耳调控基因,开发新的耳聋基因治疗方法奠定实验基础。
方法:将实验动物随机分为2组,每组20只,第一组为实验组,暴露于110 dB SPL的白噪声,8小时/天,连续7天;第二组为正常对照组,动物置于噪声环境饲养,但不接受噪声。噪声暴露前后分别行听性脑干诱发电位(ABR)检测,并于噪声暴露后将各组大鼠处死,分离、提取耳蜗组织总RNA。通过逆转录、生物素标记与Affymetrix GeneCSip} Rat Genome 230 2.0 Array芯片杂交,用Affymetrix Microarray Suite software 5.0分析扫描结果,获得两种情况下耳蜗基因表达图谱。将基因芯片的数据进行统一规化后,对两组差异基因进行比对和统计学分析,以信号强度差异比大于2或小于0.5为阳性标准,观察Nobl基因的差异倍数,并进一步利用实时定量PCR进行鉴定,免疫组化方法确定该基因的表达分布。
结果:ABR结果显示:两组大鼠噪声暴露前ABR反应闽分别为18.19±4.22 dB SPL和18.58±4.32 dB SPL;噪声暴露后,正常对照组听阐为19. 40±4.16 dB SPL,噪声组为65. 14±3.62 dB SPL,听阂值提高具有统计学意义(P<0.05)。基因芯片结果表明:噪声可以调节539种基因,其中上调279个,下调为260个,其中Nobl基因上调7.52倍。实时定量PCR结果显示:Nobl基因在噪声暴露后上调10.68倍,与基因芯片结果相一致。免疫组化观察发现:噪声暴露后大鼠耳蜗内Nobl蛋白阳性着色主要分布在螺旋神经节细胞和内、外毛细胞,血管纹细胞也有少量表达;而噪声暴露前大鼠耳蜗内未见Nobl蛋白的表达。
结论:噪声可以显著上调Nobl基因在耳蜗内的表达,Nobl基因作为转录因子很可能参与耳蜗内基因的调控,是一个新的内耳调控基因,其作用及功能有待深入研究。
方法:将实验动物随机分为2组,每组20只,第一组为实验组,暴露于110 dB SPL的白噪声,8小时/天,连续7天;第二组为正常对照组,动物置于噪声环境饲养,但不接受噪声。噪声暴露前后分别行听性脑干诱发电位(ABR)检测,并于噪声暴露后将各组大鼠处死,分离、提取耳蜗组织总RNA。通过逆转录、生物素标记与Affymetrix GeneCSip} Rat Genome 230 2.0 Array芯片杂交,用Affymetrix Microarray Suite software 5.0分析扫描结果,获得两种情况下耳蜗基因表达图谱。将基因芯片的数据进行统一规化后,对两组差异基因进行比对和统计学分析,以信号强度差异比大于2或小于0.5为阳性标准,观察Nobl基因的差异倍数,并进一步利用实时定量PCR进行鉴定,免疫组化方法确定该基因的表达分布。
结果:ABR结果显示:两组大鼠噪声暴露前ABR反应闽分别为18.19±4.22 dB SPL和18.58±4.32 dB SPL;噪声暴露后,正常对照组听阐为19. 40±4.16 dB SPL,噪声组为65. 14±3.62 dB SPL,听阂值提高具有统计学意义(P<0.05)。基因芯片结果表明:噪声可以调节539种基因,其中上调279个,下调为260个,其中Nobl基因上调7.52倍。实时定量PCR结果显示:Nobl基因在噪声暴露后上调10.68倍,与基因芯片结果相一致。免疫组化观察发现:噪声暴露后大鼠耳蜗内Nobl蛋白阳性着色主要分布在螺旋神经节细胞和内、外毛细胞,血管纹细胞也有少量表达;而噪声暴露前大鼠耳蜗内未见Nobl蛋白的表达。
结论:噪声可以显著上调Nobl基因在耳蜗内的表达,Nobl基因作为转录因子很可能参与耳蜗内基因的调控,是一个新的内耳调控基因,其作用及功能有待深入研究。