毛细管固定化酶微反应器用以α-葡萄糖苷酶的酶促反应动力学和抑制反应动力学研究

来源 :中国中西部地区第五届色谱学术交流会暨重庆市色谱年会、甘肃省第十四届色谱年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huoyinghaiyangzhixin
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固定化酶是指将游离酶与某些不溶于反应体系的固体材料相结合,限制其在特定的区域内进行酶促反应,并使酶能够回收及重复使用的技术.毛细管酶微反应器(capillary immobilized enzymemicroreactor,CIMER)是固定化酶的一种形式,以毛细管为载体,将酶固定于毛细管内壁进行酶促反应、抑制反应、酶抑制剂筛选等的研究.CIMER具有样品用量少、成本低、稳定性高、可连续使用、易于实现酶分析的自动化和微型化等优势.本实验应用戊二醛交联法将α-葡萄糖苷酶固定于毛细管内壁,通过压力将底物压入毛细管内推送至检测窗口,利用在405nm下只有产物有吸收来检测产物,从而进行酶促反应和抑制反应动力学的研究。该方法具有良好的日内重现性(峰面积0.4%,迁移时间1.0%,n=6),日间重现性(峰面积5.1%,迁移时间3.3%,n=7)和稳定性(连续使用100次,酶活降低6.7%)。实验得酶促反应米氏常数Km为0.56mM,阿卡波糖半数抑制浓度/Cso为99.48μM,与文献报导值相近。实验结果表明,所建立的方法准确可靠,稳定性高,重现性好,可适用于类似酶反应体系的研究。
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