猪vhl基因克隆及敲低克隆胚胎的构建

来源 :2014第十一届中国实验动物科学年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linlin1688
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  Von Hippel-Lindau(vhl)病为常染色体显性遗传病,主要临床表现为中枢神经系统成血管母细胞瘤和形成肾细胞癌等,在小鼠中vhl基因敲除后会引发心血管等疾病.鉴于猪是人类心血管疾病更好的模型,本文在细胞和胚胎水平对猪vhl基因进行了基因敲低研究.我们首先通过3和5RACE克隆得到猪vhl基因cDNA全长序列(2725 bp),Real-time PCR结果表明vhl基因广泛表达于猪的各种组织器官,其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达.我们进一步在猪ips细胞中对5条干扰片段进行筛选,结果表明我们获得2条高效的干扰片段,干扰效率分别达到72%(P=0.0012)和64%(P<0.01).以稳定干扰vhl基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体,构建克隆胚胎,结果表明,克隆胚胎发育的能力与对照组相比没有明显差异而且在克隆囊胚中vhl基因的干扰效率能达到71% (P<0.01).综上所述,本研究获得了猪vhl基因全长序列并在猪细胞和胚胎中对该基因进行高效干扰,从而为vhl疾病模型猪的构建奠定基础.
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