【摘 要】
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目的：构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白.方法：从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链.设计载脂蛋白AV特异性引物,含有6个保护碱基和XhoI和Eco
【机 构】
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卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室
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目的：构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白.方法：从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链.设计载脂蛋白AV特异性引物,含有6个保护碱基和XhoI和EcoRI酶切位点序列.以cDNA第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因.PCR扩张产物和pET32a原核表达载体经过XhoI和EcoRI双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4DNA连接酶16度连接过夜,连接产物转化大肠杆菌(E.coli)TOP10感受态细胞,挑选阳性克隆送公司测序.结果：挑选的阳性克隆经测序证实载脂蛋白AV基因成功克隆入pET32a原核表达载体中。结论：成功构建了载脂蛋白AV的原核表达载体，该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达，纯化后的载脂蛋白AV纯度大于90％，为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
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