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根据GenBank发布的黄病毒Bagaza毒株的NS3基因的保守序列设计了3条引物，建立了一种适用于鸭坦布苏病毒的半套氏PCR快速检测方法。采用该方法对鸭坦布苏病毒山东分离株进行检测。结果显示，半套式PCR对两株分离株均能扩增出277bp的特异性条带，而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、扩增结果均为阴性；经检测该方法第一次扩增的敏感性为1×105copies／μL，第二次扩增的敏感性为1×102copies／μL，第二次扩增的敏感性比第一次高103倍；该方法对山东省各地采集的24份疑似病料可检出22份阳性。表明本试验所建立的套式PCR方法可用于鸭坦布苏病毒感染的临床诊断和流行病学调查。