【摘 要】
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丝状真菌产生许多具有生物活性小分子次生代谢产物.包含有益的抗生素如青霉素,有害的毒素,如黄曲霉毒素.其中,VelB调控蛋白在调控次生代谢和生长发育的过程中起重要作用,
【机 构】
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上海交通大学农业与生物学院,都市农业(南方)重点开放实验室,上海200240
【出 处】
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中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会
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丝状真菌产生许多具有生物活性小分子次生代谢产物.包含有益的抗生素如青霉素,有害的毒素,如黄曲霉毒素.其中,VelB调控蛋白在调控次生代谢和生长发育的过程中起重要作用,例如,无性或有性孢子形成,菌核或子实体的形成.实验室前期工作,从玉米弯孢霉叶斑病菌(Cochliobolus lunatus)酵母双杂交文库中帅选出了与黑色素合成相关蛋白Brnl作用的阳性克隆,其中一个经测序验证为VelB蛋白.本研究首先利用同源克隆技术获得了在玉米弯孢霉叶斑病菌中与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)AnVelB基因同源的ClVelB基因,DNA全长1 011bp,不含内含子,共编码336个氨基酸,其蛋白质序列与玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica),玉米小班病菌(Cochliobolus heterostrophus),网斑病菌(Pyrenophora teres)等VelB蛋白序列同源性高达70％以上,与构巢曲霉AnVelB同源性达51％.Southern blot分析表明该基因在玉米弯孢霉叶斑病菌中以单拷贝形式存在.其次,采用Genomic Walking及RACE技术,获得了ClVelB基因的全长及两翼序列,以pCAMBIA1300改造后质粒为骨架,构建了双交换同源同组敲除载体.利用农杆菌介导转化的方式(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)以同源重组的方法对该基因进行敲除,用300μl/ml的潮霉素筛选突变株,经PCR初步检测共得到70个同源重组敲除子.该基因对生长发育,及对毒素和黑色素的调控作用正在进一步验证中.
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