齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白的原核表达、抗体制备及检测应用

来源 :中国植物病理学会2009年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjqycq
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  本文根据已报导的齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白基因序列设计了一对特异性引物,利用RT-PCR方法从感染齿兰环斑病毒的芜色葬中克隆该病毒的477by外壳蛋白基因,测序及网上序列Blast比较发现,与齿兰环斑病毒的CP基因序列(EV 683879)的同源性达到100%。外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经TPTG诱导,Ni2+NTA亲和柱纯化获得分子量与预计一致约为37kDa含硫氧还蛋白的融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原免疫兔子制备ORSV外壳蛋白的多克隆抗体,抗体的效价达到1:800000。并用制备的多抗隆抗体建立了可靠、灵敏、特异的检测兰花样品中ORSV的免疫捕获RT-PCR及Dot-blot ELISA方法,并用这两种方法对21个兰花样品进行检测。
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