【摘 要】
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目的：基于前期环境镉暴露人群代谢组学研究发现L-谷氨酰胺(L-Glutamine,Gln)的变化,本研究拟通过体外研究观察Gln生物合成代谢通路在镉致肾细胞毒性损伤中的变化规律,并探究Gln在镉致肾细胞凋亡损伤中的作用.材料和方法：体外培养人肾近端小管上皮细胞系HK-2细胞,在对数生长期用5和10 μ mol/L氯化镉(CdCl2)处理细胞24小时后观察：(1)细胞活力变化(MTT法)；(2)Gl
【机 构】
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广东省疾病预防控制中心,广州511430
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目的：基于前期环境镉暴露人群代谢组学研究发现L-谷氨酰胺(L-Glutamine,Gln)的变化,本研究拟通过体外研究观察Gln生物合成代谢通路在镉致肾细胞毒性损伤中的变化规律,并探究Gln在镉致肾细胞凋亡损伤中的作用.材料和方法：体外培养人肾近端小管上皮细胞系HK-2细胞,在对数生长期用5和10 μ mol/L氯化镉(CdCl2)处理细胞24小时后观察：(1)细胞活力变化(MTT法)；(2)Gln生物合成代谢通路的改变：细胞培养上清Gln水平(GC-MS法)以及Gln上游两个关键催化酶谷氨酰胺合成酶(RT-PCR法)和谷氨酰转肽酶(对硝基苯胺间接法)；(3)凋亡效应：外源性加入Gln(6mmol/L)或谷氨酰胺合成酶活性抑制剂MSO (2mmol/L),观察10μ mol/L CdCl2处理条件下,与对照组相比,HK-2细胞凋亡状态(Hoechst染色法)和凋亡启动蛋白Bcl-2、Bax以及cleaved-Caspase3表达水平(Western Blot法)的改变.结果：(1) CdCl2对HK-2细胞的半数抑制率浓度为40μ mol/L；(2)随着染毒剂量的增加,谷氨酰胺合成酶基因表达和谷氨酰转肽酶水平增加,细胞培养上清中Gln的水平增加,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05)；(3)与对照组相比,10μ mol/L CdCl2剂量下HK-2细胞凋亡率上升,凋亡启动蛋白Bcl-2、Bax以及cleaved-Caspase3蛋白表达水平增加,Bcl-2/Bax下降,差异具有统计学意义(P＜0.01).
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