【摘 要】
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目的：首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究,建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)最佳反应体系. 方法：以川牛膝苗期叶片为材料,利用正交试验设计对
【机 构】
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成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川成都611137
【出 处】
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世界中医药学会联合会道地药材多维评价专业委员会成立大会暨第一届学术年会
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目的：首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究,建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)最佳反应体系.
方法：以川牛膝苗期叶片为材料,利用正交试验设计对川牛膝MSAP反应体系中预扩增和选择性扩增中关键影响因素进行考察,建立川牛膝MSAP反应最佳体系.
结果：川牛膝MSAP最佳反应体系为：酶切体系(20μL),250ng DNA、0.5μL EcoRI、0.1μL HpaⅡ或0.3μL MspⅠ(HpaⅡ);连接体系(15μL)：10μL酶切产物、0.5μL EcoRI adaptor、0.5μL HpaⅡ/MspⅠadaptor、0.5μLT4连接酶;预扩增体系(20μL)：连接产物1μL、rTaq酶1U、引物分别1μL、dNTP(Mg2+)2μL;选择性扩增体系(20μL)：预扩产物稀释50倍、rTaq酶1U、引物1μL、dNTP(Mg2+)3μL,并运用优化后的体系,最终从川牛膝MSAP的256对引物中筛选出有效引物6对.
结论：优化后的体系保证了稳定的图谱、清晰的条带,筛选出的6对引物组合特异性好,能够用于后续川牛膝DNA甲基化相关实验研究,同时,为其他药用植物MSAP分析提供了参考.
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