【摘 要】
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以‘大五星枇杷花药胚状体为受体材料,采用农杆菌介导法转化单性结实iaaM基因,探讨卡那霉素浓度、农杆菌侵染时间、共培养时间以及乙酰丁香酮浓度等因素对遗传转化的影响.结
【机 构】
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四川农业大学园艺学院, 雅安625014
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以‘大五星枇杷花药胚状体为受体材料,采用农杆菌介导法转化单性结实iaaM基因,探讨卡那霉素浓度、农杆菌侵染时间、共培养时间以及乙酰丁香酮浓度等因素对遗传转化的影响.结果表明:卡那霉素最佳浓度为100mg/L,花药胚状体经预培养2～3d,农杆菌侵染15min,共培养3d,共培养基中加入AS10mg·L-1,最适合进行遗传转化.抗菌素选用250mg/L的头孢霉或安比西林750mg/L脱菌效果较好.采用优化后的转化体系进行遗传转化,最终获得了16个卡那霉素抗性芽,对抗性芽次生胚进行iaaM和NPTⅡ基因的特异性扩增检测,结果显示有9个胚系扩增出了预期目的条带,PCR阳性率为56.25％,进一步对抗性芽进行Southern杂交,结果显示其中有8个胚系出现了明显的杂交信号,表明iaaM基因已导入枇杷胚状体中,转化率约为0.5％.
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