【摘 要】
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目的：研究MC3T3按不同密度定植培养对自身细胞增殖及成骨破骨因子表达的影响. 方法：将MC3T3按照1×104/cm2、2×104/cm2、3×104/cm2、4×104/cm2、5×104/cm2的密度定植于2
【机 构】
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北京市西城区首都医科大学附属北京友谊医院口腔科 100050
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目的：研究MC3T3按不同密度定植培养对自身细胞增殖及成骨破骨因子表达的影响.
方法：将MC3T3按照1×104/cm2、2×104/cm2、3×104/cm2、4×104/cm2、5×104/cm2的密度定植于24孔板中,培养48h,倒置显微镜下观察各组密度的变化;细胞计数计算各组48h的增值率;PCNA(增殖细胞核抗原)染色检测细胞的增殖状态并进行RT-PCR检测各组RANKL、OPG的表达：提取成年小鼠原代骨髓细胞与各密度接种的MC3T3进行共培养,并通过TRAP染色检验原代骨髓细胞向破骨细胞分化的情况.
结果：1、MC3T3按1×104/cm2、2×104/cm2、3×104/cm2、4×104/cm2、5×104/cm2的密度定值培养48h后,各组的增殖率随初始定植密度的增加而减少.2、PCNA染色显示随初始定植密度的增加阳性细胞(即处于增殖状态的细胞)呈减少趋势.3、RT-PCR电泳条带经灰度值分析比较各组RANKL、OPG、OPG/RANKL,结果表明(1)随初始定植密度的增加,RANKL表达呈增加趋势,其中1×104/cm2组RANKL表达明显下降,5×104/cm2组RANKL表达明显上升,两组差异有统计学意义(p＜0.5).(2)随初始密度增加,OPG表达呈下降趋势,各组间两两比较差异不具有统计学意义(p＞0.5).(3)随初始密度增加OPG/RANKL呈下降趋势,其中1×104/cm2组OPG/RANKL明显上升,5×104/cm2组OPG/RANKL明显下降,且两组差异有统计学意义(p＜0.5).4、TRAP染色结果显示随着MC3T3密度增大,共培养体系内小鼠原代骨髓细胞中多核细胞的比例升高.
结论：MC3T3培养密度对其增殖和破骨因子的表达有一定影响,随着培养密度增高其细胞的增殖率呈下降趋势,且破骨因子RANKL表达升高,OPG/RANKL升高,且MC3T3与小鼠原代骨髓细胞共培养的结果表明MC3T3密度的增加有促进破骨细胞分化的趋势.
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