【摘 要】
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目的 研究携带黑色素瘤分化抗原MIA基因的减毒李斯特菌对恶性黑色素瘤的抑制作用及其机制.方法 构建pERL3-MIA载体,通过电转化建立携带MIA基因的LM-MIA,△inlB LM-MIA和△actA/△inlB LM-MIA重组李斯特菌;用浓度梯度稀释法测定各李斯特菌株半数致死量LD50;C57BL/6小黑鼠随机分为PBS组,LM-MIA组,△inlB LM- MIA组和△actA/△inlB
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科
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目的 研究携带黑色素瘤分化抗原MIA基因的减毒李斯特菌对恶性黑色素瘤的抑制作用及其机制.方法 构建pERL3-MIA载体,通过电转化建立携带MIA基因的LM-MIA,△inlB LM-MIA和△actA/△inlB LM-MIA重组李斯特菌;用浓度梯度稀释法测定各李斯特菌株半数致死量LD50;C57BL/6小黑鼠随机分为PBS组,LM-MIA组,△inlB LM- MIA组和△actA/△inlB LM- MIA组,首次免疫后于第7d小鼠腹部皮下接种B16F10细胞,第14d、21d重复免疫小鼠,观察并记录肿瘤大小及小鼠生存状态,应用实时定量PCR检测肿瘤组织中MIA表达量,流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及CD80+CD86+细胞阳性率.结果 经鉴定成功构建LM-MIA,△inlB LM-MIA和△actA/△inlB LM-MIA;减毒株△inlB LM 和△actA/△inlB LM的LD50比LM标准株毒力分别下降2个和4个数量级;与PBS组比较,携带MIA基因减毒产单核李斯特菌明显抑制黑素瘤的生长,增加黑素廇细胞中的MIA抗原的表达,提高小鼠脾细胞CD80+CD86+细胞阳性率,降低CD4+CD25+T细胞阳性率,差别均具有统计学意义.且双减毒菌株与单减毒菌株之间的差别具有统计学意义.(p<0.05)结论 携带MIA基因减毒产单核李斯菌的毒性明显低于李斯特菌标准株,可以有效抑制黑色素瘤生长,延长小鼠生存期.
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