【摘 要】
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退火温度是PCR反应过程的一个重要的组成部分.本文以牛筋草地上组织DNA为模板,选取适合牛筋草的6个ISSR引物,分别对其退火温度进行温度梯度试验.结果表明,同一引物,对于不同的物种,退火温度不同;同一物种不同引物之间退火温度也有差别.退火温度取决于引物的碱基组成、长度和浓度。一般来说，较低的退火温度可提高PCR反应的敏感性，但其特异性较差;较高的退火温度则可提高PCR反应的特异性但却降低了其扩增
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所、杂草鼠害生物学与治理重点开放实验室,北京100193;山东农业大学植物保护学院,泰安271018
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退火温度是PCR反应过程的一个重要的组成部分.本文以牛筋草地上组织DNA为模板,选取适合牛筋草的6个ISSR引物,分别对其退火温度进行温度梯度试验.结果表明,同一引物,对于不同的物种,退火温度不同;同一物种不同引物之间退火温度也有差别.
退火温度取决于引物的碱基组成、长度和浓度。一般来说，较低的退火温度可提高PCR反应的敏感性，但其特异性较差;较高的退火温度则可提高PCR反应的特异性但却降低了其扩增效率。合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右，实际试验时应根据所要求的PCR反应的特异性和灵敏性做出相应的调整。同一引物，对于不同的物种，退火温度可能不同，如Huang and Sun用ISSR技术检测番薯时引物UBC811的退火温度为53℃; Herrera R在运用ISSR技术检测葡萄时此引物所采用的退火温度为55℃;张忠廉运用ISSR技术检测砂仁遗传多样性时所采用的退火温度为52℃;尽管有很多公式可以用于计算引物的Tm值，然而这些公式并不是对所有长度的引物都适用。对于特定引物并不能精确地计算出其Tm值。因此，优化退火温度的最理想方法是设置一系列温度梯度来确定最佳退火温度。
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