NANOG基因对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及细胞周期的影响

• 作 者: 曹江;孟凡静;李莉;吕超;周俊;程海;陈伟;陈翀;徐开林;
• 机 构: 徐州医学院血液科、移植免疫实验室 221002
• 出 处: 第四届全国血液肿瘤学术大会暨第七届全国淋巴肿瘤诊治进展研讨会
• 发表日期: 2014年期

　　目的 探讨NANOG 基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株中的表达,研究下调该基因的表达对细胞增殖和细胞周期的影响以及可能机制.方法 选取3 种急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat 为研究对象.利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblot 技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat 等细胞系NANOG 的表达情况.通过构建携带NANOG特异性shRNA 的慢病毒载体包装病毒颗粒(pLB-shNANOG-1 和pLB-shNANOG-2),感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并作为实验组；以空质粒(pLB-shcontrol)感染的细胞和正常MOLT-4细胞分别作为阴性对照组和空白对照组.在基因及蛋白水平检测各组NANOG 干扰效率.用CCK-8法及流式细胞仪检测实验组和对照组细胞增殖能力及细胞周期的变化,并利用实时定量PCR 技术检测p53 通路相关基因的表达变化.结果 包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83～3.12)×108 IU/mL.两种shRNA 可有效下调病毒感染MOLT-4 细胞的NANOG 基因及蛋白的表达.CCK-8 法检测显示shNANOG-1 及shNANOG-2 组细胞在不同时间点其OD 值较MOLT-4 组及sh-control 组下降,在培养72 h 后最为明显,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.001).细胞周期检测显示,shNANOG-1 及shNANOG-2 组细胞在G0/G1 期细胞比例较MOLT-4 组及sh-control 组高(P＜0.001),但两组细胞在S 期细胞比例较MOLT-4 组及sh-control 组低(P＜0.01),而在G2/M 期细胞比例在各组间差异无统计学意义.实时定量PCR 法证实shNANOG-1 及shNANOG-2 组细胞中TP53 及CDKN1A 基因表达上调,而MDM2 及CCND1 基因表达下调,实验组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NANOG 在部分人ALL 细胞系中表达,下调NANOG 后可通过MDM2-TP53-CDKN1A 通路抑制白血病细胞的增殖,并使细胞阻滞于G0/G1 期.