【摘 要】
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目的 探讨DAB21P/AIP1A-1Cs异构体转换在肿瘤发生发展中的作用及机制,为开展异构体特异性靶向干预提供理论依据。方法 通过慢病毒系统,建立稳定的异构体1A和1Cs过表达和敲低的多种肿瘤细胞株(B16F10,168-FAR,4T07,4T1,RWPE-1,PC3)；细胞划痕实验和Time-lapse实验检测细胞迁移和活动能力；Transwell细胞侵袭实验评价细胞侵袭能力；小鼠尾静脉注射、
【机 构】
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广州医科大学泌尿外科研究所广东省泌尿外科重点实验室,广东广州510180 中山大学公共卫生学院预防
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目的 探讨DAB21P/AIP1A-1Cs异构体转换在肿瘤发生发展中的作用及机制,为开展异构体特异性靶向干预提供理论依据。方法 通过慢病毒系统,建立稳定的异构体1A和1Cs过表达和敲低的多种肿瘤细胞株(B16F10,168-FAR,4T07,4T1,RWPE-1,PC3)；细胞划痕实验和Time-lapse实验检测细胞迁移和活动能力；Transwell细胞侵袭实验评价细胞侵袭能力；小鼠尾静脉注射、皮下注射、原位注射肿瘤细胞实验分析异构体1A和1Cs在整体动物体内对肿瘤发生发展的影响；激光共聚焦检测异构体1A和1Cs的定位；免疫沉淀和GST pull-down实验分析异构体1A和1Cs相互作用蛋白及介导的信号通路；荧光素酶报告基因检测肿瘤细胞中异构体1A和1 Cs的启动子活性。结果 成功构建了异构体1A和1Cs过表达和敲低的多种肿瘤细胞株；体外实验发现异构体1A抑制细胞迁移和侵袭,而异构体1Cs促进细胞迁移和侵袭；小鼠肿瘤模型证实异构体1A抑制肿瘤的生长和转移,而异构体1Cs促进肿瘤的转移；机制研究揭示异构体1A和1Cs通过PH结构域与FAK相互作用,异构体1A存在于胞质,而异构体1Cs定位于细胞膜,且通过激活FAK/Src-Rac信号途径促进肿瘤细胞侵袭转移；异构体1A和1Cs存在不同的启动子,在肿瘤细胞中通过差异启动子活性介导异构体1A-1C转换。结论 肿瘤细胞DAB2 IP/AIP1基因可变启动子活性介导了异构体1A-1Cs转换；异构体1A抑制肿瘤生长和转移,异构体1Cs激活FAK/Src-Rac信号途径促进肿瘤侵袭转移；异构体1A-1Cs转换双重促进肿瘤生长转移。本研究不仅为揭示蛋白异构体在肿瘤发生发展中的作用提供新的思路,而且为发现新的肿瘤分子标记和开展异构体特异性靶向干预提供理论依据。
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