【摘 要】
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目的：阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种渐进性神经退化性疾病,临床表现为认知和记忆功能不断恶化,日常生活能力进行性减退,并有各种神经精神症状和行为障碍,严重危害老年人健康.AD的发病机制尚不明确,相关假说如胆碱能假说、氧化应激假说和β-淀粉样蛋白(Aβ)假说暗示可通过丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinesterase,BChE)抑制、抗氧化以及Aβ聚集抑制作用来
【机 构】
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四川大学化学工程学院,成都,610065
【出 处】
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世界中医药学会联合会中药新药创制专业委员会成立大会暨第一届学术年会
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目的：阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种渐进性神经退化性疾病,临床表现为认知和记忆功能不断恶化,日常生活能力进行性减退,并有各种神经精神症状和行为障碍,严重危害老年人健康.AD的发病机制尚不明确,相关假说如胆碱能假说、氧化应激假说和β-淀粉样蛋白(Aβ)假说暗示可通过丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinesterase,BChE)抑制、抗氧化以及Aβ聚集抑制作用来减轻症状.杜鹃兰Cremastra appendiculata (D.Don) Makino,为兰科杜鹃兰属植物,是山慈菇基源植物之一,以干燥假鳞茎入药,分布于黄河流域至西南、华南等地.其味甘性凉,微辛,归肝、脾经,为中医常用的抗癌中药.现代研究表明菲类和联苄类化合物是其主要成分,细胞毒性和抗血管生成活性亦有报道,未见其抗阿尔茨海默病的活性报道.课题组前期研究发现杜鹃兰95％乙醇提取物表现出良好的选择性BChE抑制活性(IC50=23.66±4.20 μg/mL),用不同极性溶剂顺序萃取后进一步确定活性提取物为乙酸乙酯(EA)部位(IC50=7.14±1.11 μg/mL),并发现该部位的总酚含量最高(163.04±0.92 mg GAE/g dw),暗示酚类化合物有可能是其中的活性成分,为揭示该部位抗AD的活性成分,进行了后续的活性跟踪指导下的化学成分研究.方法：采用Ellman比色法评价流份/化合物的胆碱酯酶抑制活性,DPPH和ABTS自由基清除实验评价抗氧化活性,硫黄素-T荧光法评价β-淀粉样蛋白聚集抑制活性,以BChE抑制活性为指导,利用silica gel、MCI gel CHP 20P、Toyopearl HW-40等色谱法对杜鹃兰乙酸乙酯部位进行分离纯化.结果：从杜鹃兰中分离得到6个化合物,其中联苄类1个,菲类4个,鱼藤酮类1个,运用现代波谱学技术鉴定了其结构分别为：batatasin Ⅲ (1),coelonin (2),orchinol (3),blestriarene A(4),2-hydroxy-5,7-dimethoxyphenanthrene (5)和灰叶素(6).胆碱酯酶抑制活性测定结果显示化合物2、3和5具有选择性BChE抑制活性,其IC50值分别为4.76,8.41和9.49μg/mL.酶抑制动力学研究表明2与3均为混合型BChE抑制剂,其Ki值分别为3.09和4.78μg/mL.在DPPH自由基清除实验中,2和3的清除能力最强,EC50分别为2.60±0.11 μ g/mL和2.78±0.07 μ g/mL,略强于阳性对照品抗坏血酸(EC50=3.95±0.24 μg/mL),但弱于没食子酸(EC50=0.99±0.02μg/mL).2和3同样表现出良好的ABTS自由基清除活性,EC50分别为1.70±0.05μg/mL和1.29±0.14μg/mL,强于抗坏血酸(EC50=5.73±0.35 μg/mL),弱于没食子酸(EC50=0.40±0.003 μg/mL).在浓度为50 μ g/mL时,化合物2,3和5对β-淀粉样蛋白聚集的抑制率分别为83.02％,79.34％,80.85％；浓度增加至100μg/mL时,抑制率分别为89.75％,83.69％,86.37％,仅略弱于阳性对照品姜黄素(50 μ g/mL和100μg/mL时的抑制率分别为86.01％和92.97％).结论：传统中药杜鹃兰有应用于阿尔茨海默病治疗中的潜力,化合物2和3在体外发挥了多靶点协同治疗AD的活性,有进一步开发成先导化合物的价值.
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