驯鹿生长素Ghrelin全长cDNA的克隆及序列分析

• 作 者: 杨银凤;朱雪敏;都格尔斯仁;
• 机 构: 内蒙古农业大学动物科学与医学学院动物胚胎与发育生物学研究室,呼和浩特 010018
• 出 处: 中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会
• 发表日期: 2008年期

Ghrelin主要是由胃产生的一种含有26～28个氨基酸残基的多肽。
本研究根据本课题组已获得的驯鹿GhrelincDNA的部分片段设计一条序列特异性引物作为上游引物，3接合器引物作为下游引物，克隆驯鹿Ghrelin cDNA的3末端序列。另外，采用反向嵌套PCR RACE法，根据驯鹿GhrelincDNA的已知序列，设计一条5末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物，首先进行反转录(RT)，然后将反转录成的cDNA进行环化，最后进行反向嵌套巢式PCR，克隆驯鹿Ghrelin cDNA的5末端序列。
结果成功地克隆出了驯鹿Ghrelin cDNA的3和5末端序列，从而得到604 bp的驯鹿Ghrelin cDNA全序列，其中包含57bp 5非翻译区(UTR)、405bp的开放读码框(ORF)、128bp的3UTR和poly(A)14。序列同源性比较显示驯鹿GhrelincDNA与山羊、绵羊和牛的同源性分别是92.0％、90.8％和89.5％：与猪和人的同源性分别是69.5％和65.2％；与鸡的同源性仅为33.8％。表明Ghrelin的结构具有明显的种属特异性。驯鹿Ghrelin cDNA全序列的获得为进一步研究其生理和病理生理作用奠定了基础。