【摘 要】
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目的:分别设计能特异切割HCV基因组的核酶、U-嵌合体核酶、10-23脱氧核酶(10-23DNAzyme)及小干涉RNA,以期用于丙型肝炎的基因治疗。方法:(1)设计合成针对HCV RNA基因组非编码
【机 构】
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吉林大学第一医院 长春 130021
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目的:分别设计能特异切割HCV基因组的核酶、U<,1>-嵌合体核酶、10-23脱氧核酶(10-23DNAzyme)及小干涉RNA,以期用于丙型肝炎的基因治疗。方法:(1)设计合成针对HCV RNA基因组非编码区及核心区特定位点的三种核酶,克隆入质粒载体pGEM并进行体外转录,对HCV基因组进行体外切割;(2)选择其中切割效率最高的核酶与U<,1>小核核糖核酸构建成嵌合体核酶,观察在细胞水平对HCVRNA的切割效率;(3)设计合成针对HCV 5,-NCR区不同位点的10-23DNAzyme,观察不同镁离子浓度及时间下对HCV的切割效率。结果:核酶及U<,1>小核核糖核酸嵌合体核酶在细胞水平对HCV RNA均具有切割活性,二者的切割活性基本相等;核酶的切割位点越靠近起始密码子则其切割效率越高;针对HCV基因组设计的小干涉RNA在细胞水平能有效抑HCV的复制和表达。结论:核酶、U<,1>嵌合体核酶、10-23脱氧核酶在细胞水平中都显示了较高效的抗HCV作用,作为有前途的基因治疗药物可以进一步用于动物实验研究。
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