【摘 要】
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目的 建立大鼠睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系,为探讨受试物对睾丸毒性的作用机制提供合适的体外研究方法.并在睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系中,观察氟咯草酮对细胞
【机 构】
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上海市食品药品检验所 上海,201203
【出 处】
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中国药理学会药检药理专业委员会第十一届学术研讨会
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目的 建立大鼠睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系,为探讨受试物对睾丸毒性的作用机制提供合适的体外研究方法.并在睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系中,观察氟咯草酮对细胞早期凋亡的影响.方法 采用胰蛋白酶和胶原酶二步消化法分离断乳Wistar雄性大鼠的睾丸组织,获取含支持细胞和生精细胞的混合细胞.混合细胞培养48h后,胰酶消化并用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养液制成单细胞悬液.调整细胞浓度为2× 106/ml,取1ml细胞悬液种植于培养皿中.培养48h后,细胞分为5组,包括空白对照组、溶媒对照组、以及氟咯草酮低、中、高剂量组,溶媒对照组加入丙酮(0.5％),受试物组加入不同浓度氟咯草酮(终浓度为18、30、50μg/ml)处理24h,随后去除受试物及溶媒,继续培养48小时后收集上清液中的悬浮细胞,并将贴壁细胞经胰酶消化,合并两部分细胞用PBS洗涤2次.采用流式细胞术AnnexinV/PI双染法测定氟咯草酮对共培养体系中细胞早期凋亡的影响.结果 经两步酶法分离后,细胞状态良好.显微镜下可见支持细胞贴附于培养皿底层；生精细胞为悬浮细胞,散落分布于支持细胞中.混合细胞的存活率可达91.8％.与溶媒对照组相比,氟咯草酮50μg/ml组的细胞早期凋亡率明显增加,差别具有统计学意义(P＜0.05)),中、低剂量组未见明显差异.结论 建立大鼠睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系一定程度上可以模拟睾丸组织的内环境,以便于观察受试物对睾丸整体功能的影响.经测定,氟咯草酮可诱导大鼠睾丸支持细胞-生精细胞共培养体系中的细胞早期凋亡.
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