【摘 要】
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为建立一种检测迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)毒株方法以及研制其亚单位疫苗,本研究根据该菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白eseB基因序列设计引物,并在引物两端添加酶切位点BamHⅠ和HindⅢ,以迟钝爱德华氏菌L-49231菌株总DNA为模板,扩增获得eseB基因；通过重组表达,电泳检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组eseB蛋白；采用纯化的重组蛋白制备免疫血清,对诱导表达的重组蛋
【机 构】
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大连海洋大学,辽宁省高校海洋生物资源可持续利用重点实验室,中国大连116023
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为建立一种检测迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)毒株方法以及研制其亚单位疫苗,本研究根据该菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白eseB基因序列设计引物,并在引物两端添加酶切位点BamHⅠ和HindⅢ,以迟钝爱德华氏菌L-49231菌株总DNA为模板,扩增获得eseB基因；通过重组表达,电泳检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组eseB蛋白；采用纯化的重组蛋白制备免疫血清,对诱导表达的重组蛋白进行Western blot分析.实验结果显示： PCR扩增得到了594bp的eseB基因开放阅读框；重组表达菌在IPTG诱导浓度为0.2mg/mL,诱导时间为1h时能很好的表达目标蛋白,其分子量约为25KDa；重组表达的eseB蛋白免疫新西兰兔获得效价为1∶512000的高免血清；经Western blot分析,诱导表达的目的蛋白与免疫血清产生特异性反应条带；重组eseB蛋白免疫健康大菱鲆后,其血清中抗体效价可达到1∶1024；注射重组eseB蛋白对大菱鲆免疫保护率为75％,通过ELISA检测感染后发病大菱鲆腹水中分离菌eseB蛋白均为阳性.
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实验选取规格一致,初始体重为2.08±0.04g的黄颡鱼,随机分为4组,每组3个重复,每个重复20尾,分别在每周的开始饥饿处理0d (S0)、1d(S1)、2d(S2)、3d(S3)后,恢复投喂满一周,进行循环实验8周,共56天.实验期间各组均饱食投喂.结果显示：循环饥饿对黄颡鱼成活率没有显著影响(P＞0.05)；S1组黄颡鱼的增重率和特定生长率高于对照组,但与对照组没有显著差异(P＞0.05),
本文研究了用气相色谱/质谱法测定比较3种海参与3种贝类脂肪酸及脂肪醛二甲基缩醛的方法。该6种原料经Folch法提取总脂，用10％硫酸-甲醇溶液对其进行甲酯化反应，通过气相色谱/质谱法对其脂肪酸及脂肪醛二甲基缩醛的组成进行分析。实验结果表明：10％硫酸-甲醇溶液能有效地对脂肪酸进行甲酯化衍生；同时促使烯醚键断裂，并与甲醇发生缩醛反应生成脂肪醛二甲基缩醛。通过气相色谱/质谱分析，从3种海参与3种贝类的
利用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(LC-Q-TOF)分析美国红参(Parastichopuscalifornicus)脑苷脂的分子种组成.以氯仿-甲醇(2∶1,V/V)溶液提取,经皂化和SPE净化后,在正离子模式下,通过自动二级(MS/MS)方式同时获取样品脑苷脂分子的一级和二级质谱图.筛取含180 Da中性丢失碎片的分子,再结合二级质谱中的长链碱和脂肪酸碎片,确定每种脑苷脂分子的结构
根据已知的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)生长激素(GH)基因cDNA序列,把黄颡鱼GH成熟肽的cDNA定向插入表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE分析表明黄颡鱼GH以融合蛋白的形式得到了表达,分子量约为20.4KD,与预期的大小一致.在IPTG终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h的最佳诱导表达
为对南极磷虾及其制品中矿物质进行初步的安全性评价,本实验采用微波消解-电感耦合等离子-质谱法(MD-ICP-MS)测定了南极磷虾整虾、虾膏、虾糜、虾粉、虾油中钾(K)、钙(Ca)、磷(P)、砷(As)、硒(Se)、锌(Zn)、铜(Cu)、镉(Cd)、铬(Cr)、镍(Ni)、汞(Hg)的含量,采用离子选择性电极法测定了南极磷虾各制品中氟(F)的含量.结果表明,12种矿质元素在南极磷虾各制品中均不同程
28±2℃温度条件下,按200mg/kg的剂量对罗非鱼单次药饵饲喂磺胺间甲氧嘧啶(SMM)后,采用HPLC法测定各组织中的药物浓度,研究SMM在罗非鱼体内的药物代谢动力学.结果发现,药物在各组织中(血液、肌肉、肝脏和肾脏)的最大峰浓度Cmax分别为22.65、7.13、40.50、22.62 ug/mL(ug/g)；达峰时间Tmax分别为7.52、7.02、1.00/8.00和2.00/10.00
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[目的]2013年6月上海长风公园水族馆饲养的黄金鲹出现了大量死亡现象，症状表现为体表有溃疡，轻微烂鳃；鳃色灰白，有粘液；体表和鳃未见寄生虫。[方法]从发病黄金鲹的病变部位鳃、肝、肾、脾脏及肠道分离出优势菌。通过16s rRNA的分子生物学亲缘关系分析方法分析鉴定，并进行了药物敏感性实验、制作组织病理切片。[结果]确认黄金鲹中优势菌为鲍希瓦氏菌(Shewanella haliotis)、弗尼斯弧菌
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