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目的
了解造血干细胞移植受者人巨细胞病毒（HCMV）UL97基因耐更昔洛韦（GCV）突变情况。
方法前瞻性收集2008至2010年在北京大学人民医院血液病研究所行骨髓干细胞移植术后血浆HCMV DNA阳性时间至少持续2周的患者43例，其中男29例，女14例，平均年龄21岁。利用实时荧光定量PCR检测HCMV DNA的负荷，收集49份血浆标本检测UL97耐GCV突变。应用改进的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法（PCR-RFLP）检测UL97 M460V/I、H520Q、A591V、A594V、L595S/F及C603W共8种常见耐GCV突变；使用PCR直接测序法（PCRDS）检测UL97耐GCV突变；建立扩增阻滞突变系统实时PCR方法（ARMS RT-PCR）检测UL97 A594V耐药突变。
结果PCR-RFLP分析方法未检测出8种已知的UL97耐GCV突变。PCR-DS方法未检测到已知的UL97耐GCV突变，新发现UL97 R494P、T502A、N558D及G561S突变。成功建立UL97 A594V ARMS RT-PCR检测方法，结合核酸提取试剂的使用，其检测下限至少达7.5×102拷贝数/ml，检测筛选的临床标本发现2例患者为阳性，UL97 A594V耐药突变率为4.7%（2/43）。
结论构建的ARMS RT-PCR方法具有较高的敏感性，可用于临床监测UL97 A594V耐药突变。（中华检验医学杂志,2013,36:461-466）