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取新生奶牛肋骨，剪成lmm3大小骨片，胰蛋白酶消化5次，D-Hanks彻底冲洗后，骨片置于含15％FBS的DMEM中培养，获取单层细胞。倒置显微镜下观察细胞形态，改良钙-钴法染色碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，比色法检测ALP活性，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OC) mRNA，放射免疫法检测骨钙素蛋白及茜素红染色观察细胞钙化结节，对所获得细胞进行鉴定。结果显示，采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性：钙-钴法染色ALP呈阳性：培养7d后可检测到OC mRNA表达，12d后细胞上清液中可检测到OC蛋白；诱导培养2w细胞基质可见钙化结节形成。提示采用胰蛋白酶消化，组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性，本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞。