【摘 要】
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目的 探讨微RNA(miRNA)-132在胃癌恶性表型中的功能及其通过sox2基因发挥作用的机制.方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各个胃癌细胞系及胃癌细胞系中亲本细胞与高
【机 构】
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710032 西安,第四军医大学西京消化病医院消化内科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 探讨微RNA(miRNA)-132在胃癌恶性表型中的功能及其通过sox2基因发挥作用的机制.方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各个胃癌细胞系及胃癌细胞系中亲本细胞与高低转移细胞系之间miRNA-132的表达差异.通过瞬时转染miRNA-132的类似物及抑制剂,运用XTT、Transwell及流式细胞学等方法检测miRNA-132对体外细胞的增殖、转移、侵袭及凋亡能力的影响.通过荧光素酶报告基因法及Western印迹检测miRNA-132与sox2基因的关系.构建包含和不包含sox2基因的3UTR的载体,分别转染胃癌细胞系,并共转染miRNA-132的类似物或抑制剂,通过Western印迹检测和功能试验研究miRNA-132是否通过sox2基因调控胃癌增殖和转移.在组织标本中通过qRT-PCR验证miRNA-132与sox2基因的表达关系.结果 通过qRT-PCR发现miRNA-132在胃癌细胞系中的表达量明显高于胃黏膜正常细胞GES-1,在高转移细胞系SGC-7901M、SGC-9811-P中的表达量明显低于低转移细胞系SGC-7901NM、SGC-9811.瞬时转染miRNA-132类似物后,通过XTT发现在MKN-28及MKN-45中能够抑制胃癌细胞的增殖,通过Transwell发现能够抑制MKN-28及MKN-45的侵袭及转移.荧光素酶报告基因法表明miRNA-132可直接与sox2基因结合,抑制其表达.sox2基因质粒与miRNA-132类似物共转染后发现miRNA-132可直接结合sox2基因的3-UTR,在蛋白水平明显抑制sox2基因的表达,而在转录水平信使核糖核酸(mRNA)未发生明显改变,功能试验表明miRNA-132通过靶向sox2基因抑制胃癌细胞的增殖、转移及侵袭.miRNA-132与sox2基因在胃癌组织标本中的表达呈明显负相关.结论 miRNA132在胃癌中通过抑制sox2基因发挥抑癌作用,这为miRNA参与胃癌的发生发展再一次提供了有力证据,也为胃癌的靶向分子治疗提供了更大的可能性.
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