【摘 要】
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为了研究猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的表达对宿主细胞的功能的影响,本研究通过构建猪传染性胃肠炎病毒的N基因的重组表达质粒pEGFP-C1-N,然后在LipofectamineTM2000介导下转染
【机 构】
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河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室,河南洛阳,471003
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会暨饲料饲草学分会2015年度学术交流会
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为了研究猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的表达对宿主细胞的功能的影响,本研究通过构建猪传染性胃肠炎病毒的N基因的重组表达质粒pEGFP-C1-N,然后在LipofectamineTM2000介导下转染猪睾丸细胞ST细胞,活细胞状态下直接观察EGFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位.结果显示,转染后4~5h出现荧光蛋白表达,24h达到高峰,TGEV的N蛋白主要定位于细胞质中,进一步的激光共聚焦共定位显示TGEV N蛋白主要定位于ST细胞的内质网上面.G418筛选4周后细胞形成稳定的单个克隆,进一步的挑选和扩大化后,RT-PCR和Western-blot验证TGEV N蛋白的mRNA及其蛋白在ST细胞中稳定表达,提示本研究建立了稳定表达的TGEV N蛋白的ST细胞株,为进一步研究TGEV N蛋白对ST细胞的生理功能的影响及其在TGEV致病过程中的作用打下了基础.
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