【摘 要】
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目的 为了开展胆汁排泄和药物肝脏排泄体外研究,构建了Na+-牛黄胆酸盐共转运多肽(NTCP)的稳定表达细胞模型.方法 从人肝细胞钓取NTCP基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-NTCP；使用脂质体介导的方法将表达载体转染人胚肾细胞HEK293,通过载体携带的G418抗性筛选标记,筛选表达抗性基因的细胞克隆；通过western blot及qPCR(Real-time Quantitative P
【机 构】
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释药技术与药代动力学国家重点实验室,天津药物研究院新药评价有限公司 天津医科大学药学院
【出 处】
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2015第11届全国药物和化学异物代谢学术会议
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目的 为了开展胆汁排泄和药物肝脏排泄体外研究,构建了Na+-牛黄胆酸盐共转运多肽(NTCP)的稳定表达细胞模型.方法 从人肝细胞钓取NTCP基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-NTCP；使用脂质体介导的方法将表达载体转染人胚肾细胞HEK293,通过载体携带的G418抗性筛选标记,筛选表达抗性基因的细胞克隆；通过western blot及qPCR(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)方法进一步确认各细胞克隆中NTCP的表达；检测各细胞克隆对同位素标记的NTCP标准底物3H-estrone sulfate的摄取活性,筛选出高转运活性的细胞克隆.
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