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脑心肌炎病毒(EMCV)可引起仔猪的急性致死性心肌炎和母猪的繁殖障碍等疾病,并具有重要公共卫生学意义。本研究采用杂交瘤细胞技术,研制获得18株能稳定分泌抗EMCV抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清ELISA抗体效价为1:1600～1:6400,小鼠腹水抗体效价达1:1000000.15株单抗的亚类为IgG1,3株单抗的亚类为IgG2b,所有单抗的轻链均为κ型。Western blot结果表明,其中17株能特异性识别病毒VP1蛋白,2B6株能识别病毒VP2蛋白。IFA结果为,11株单抗都能识别EMCV.利用原核表达系统,对VP1蛋白进行截短表达,结果获得41个重组截短蛋白,采用间接ELISA和Western blot精确定位了17株单克隆抗体所识别的抗原表位,结果共鉴定出5个抗原表位:V(2)ENAEK(7)(单抗6E11、7A7和7C9识别),A(17)DFVA(21)(单抗2C8识别),F(19)VAQPVY(25)(单抗1D1、1F3、2A2、2A5、4B2、4B9、4F1、5A1、5A11和5G1识别),P(42)IGAFTVK(49)(单抗1G8和3A9识别)和F(36)YDRSSPIGAFTVKS(50)(单抗4E2识别).选择EMCV VP1单抗7C9进行辣根过氛化物酶标记，应用纯化的EMCV重组VP1蛋白作为包被抗原，通过反应条件优化，建立了检测EMCV抗体的阻断ELISA方法。通过对30份EMCV阴性血清检测，确定其判定标准为:阻断率PI>39.10％时为阳性，PIC29.46%时为阴性，29.46%
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