【摘 要】
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亲水相互作用色谱法(HILIC)自本世纪初开始获得广泛的重视,并已证实是一种适于用不同酸碱特性且可电离的化合物的有效手段。随着蛋白质组学研究的开展,越来越多的蛋白质和多肽样品使用HILIC进行分离，并显示出了较高的质谱检测灵敏度。HILIC使用极性固定相,对亲水性样品保留较强,这与对疏水组分保留较强的使用非极性固定相的RPLC具有良好的正交性。同时,HILIC与RP均使用水与有机溶剂作为洗脱液,具
【机 构】
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华东理工大学,上海,200237 齐齐哈尔大学,齐齐哈尔,161006
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亲水相互作用色谱法(HILIC)自本世纪初开始获得广泛的重视,并已证实是一种适于用不同酸碱特性且可电离的化合物的有效手段。随着蛋白质组学研究的开展,越来越多的蛋白质和多肽样品使用HILIC进行分离，并显示出了较高的质谱检测灵敏度。HILIC使用极性固定相,对亲水性样品保留较强,这与对疏水组分保留较强的使用非极性固定相的RPLC具有良好的正交性。同时,HILIC与RP均使用水与有机溶剂作为洗脱液,具有良好的兼容性,克服了以往连续二维正-反相模式中溶剂布匹配的缺点。因此,本文构建了HILIC-RP连续二维系统,并分离的多肽样品,对连续二维正-反相模式进行了研究。多肽样品由HILIC柱分析,使用降低有机溶剂含量的溶剂梯度洗脱。流动相为A乙腈；B 5mMKH2PO4水溶液,流速0.8mL/min。多肽样品的UV214nm紫外可见光谱图。从图中可以看出,标准蛋白酶解后的多肽样品成分复杂,先出峰组分为疏水性较强的多肽,在HILIC上保留较弱,而亲水性组分保留较强,出峰顺序靠后,形成了疏水性组分和亲水性组分分组分离的现象。
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