中药复方冠心Ⅱ号心脏保护的抗凋亡及抗炎机理研究

• 作 者: 张学娅 黄熙 任平 许东云 张颖 罗珊珊 王晓雨
• 机 构: 昆明医学院第一附属医院 云南昆明 650032 中南大学湘雅医院中西医结合研究所 湖南长沙 410
• 出 处: 第六届全国中西医结合基础理论研究学术研讨会暨第二届湖南省中西医结合学会肝病专业学术年会
• 发表日期: 2010年7期
• 关键词: 冠心Ⅱ号 心肌梗塞 Akt信号通路 炎症反应 吸收生物活性成分

目的：冠心Ⅱ号(GⅫ)是治疗冠心病的有效中药复方，其药物组成为丹参、川芎、红花、赤芍、降香按照2：1：1：1：1比例构成。丹川红(DCH)煎剂是GXⅡ子方，其药物组成为丹参、川芎、红花按照2：1：1比例构成。本研究探索：(1)长期小剂量GXⅡ经由Akt信号通路抑制心肌凋亡的心脏保护机理;(2)GXⅡ急性灌胃经由NF-κB诱导抗炎的心脏保护机理;(3)DCH煎剂经由Akt／NF-κB通路诱导的抗炎作用是否与吸收生物活性成分FAT(阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素)相关。
方法：(1)SD大鼠被随机分为四组：假手术组、对照组、口服GⅫ剂量组(2.5 g／kg／d和0.5 g／kg／d).大鼠灌胃GⅫ或等容积0.9％NaCl qd×15d。大鼠急性心肌梗塞(acute myocardialinfarction,AMI)造模前30 min最后一次灌胃GⅫ或0.9％NaCl，除了假手术组，其余大鼠均结扎冠状动脉。AMI 24-h后采集大鼠心脏，应用组织化学染色法测定24-h心肌梗塞面积(IZ)。大鼠AMI 3-h后采集心脏，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠心肌缺血区心肌细胞凋亡指数;免疫组化法检测心肌细胞凋亡调控基因Bcl-2，Bax比值;免疫印迹法测定心肌细胞胞浆总Akt(total Akt)与磷酸化Akt(p-Akt)活性，心肌细胞胞浆和线粒体中的细胞色素C(cytochrome C)释放;比色法测定心肌细胞caspase-3，caspase-9活性。(2)SD大鼠被随机分为四组：假手术组、对照组、口服GⅫ剂量组(15 g/kg，5g/kg)。大鼠AMI造模前30 min一次性灌胃GⅫ
或等容积0.9％NaCl。除了假手术组，其余大鼠均结扎冠状动脉.AMI 24-h后采集大鼠心脏，测定IZ。大鼠AMI 3-h后，采集心脏及血清，应用免疫印迹法测定心肌细胞胞浆与胞核的核因子(Nuclearfactor-kappa B，NF-κB)表达，酶联免疫法(EUSA)测定C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)血清水平。(3)SD大鼠被随机分为四组：假手术组、对照组、DCH煎剂(13.33 g/kg)组、FAT组(阿魏酸F 3.14 mg／kg;羟基红花黄色素A 48.76mg／kg和丹参素T 17.08 mg／kg)。大鼠AMI造模前30 min一次性灌胃DCH煎剂或FAT。除了假手术组，其余大鼠均结扎冠状动脉。AMI 24-h后采集大鼠心脏，测定IZ。大鼠AMI 3-h后，采集心脏及血清，用ELISA法测定CRP血清水平;免疫印迹法测定心肌细胞胞浆与胞核的NF-κB表达，心肌细胞胞浆total Akt与p-Akt活性。
结果：(1)与对照组相比，长期小剂量口服GⅫ(2.5g/kg)降低IZ、降低心肌细胞凋亡指数、增加p-Akt活性、升高Bcl-2／Bax比值、抑制cytochrome C释放、抑制caspase-3，caspase-9活性。GⅫ(0.5g／kg)在上述指标则无治疗效果。(2)与对照组相比，GXII(15g／kg)能降低IZ、降低NF-κB表达、降低血清TNF-α,IL-6，CRP水平。GⅫ(5g／kg)在上述指标则无治疗效果。(3)与对照组相比，DCH煎剂及FAT都能降低IZ、增加p-Akt活性、降低NF-κB表达、降低血清CRP水平。
结论：(1)长期小剂量预先灌胃GⅫ降低IZ，通过激活心肌细胞Akt酶活性，进一步经由调节Bcl-2家族蛋白表达，cytochrome C介导的Caspases通路，从而起到抗心肌细胞凋亡作用。(2)一次性灌胃GⅫ降低IZ，经由抑制NF-κB蛋白表达，降低前炎性细胞因子IL-6，TNF-α水平，进一步降低炎症指标血清CRP水平，从而起到抗炎样心脏保护作用。(3)DCH煎剂及其成分FAT都可降低IZ，经由Akt／NF-κB通路降低血清CRP水平，达到抗炎性心脏保护作用。DCH煎剂抗炎作用的效应成分是FAT.上述研究表明：GⅫ对心肌梗塞大鼠的心脏保护作用可能经由Akt信号通路，通过抑制凋亡与炎症机制来发挥;Akt信号通路是GⅫ心脏保护作用的上游靶点;FAT是GⅫ抗凋亡、抗炎作用的吸收生物活性成分。