【摘 要】
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运用RT-PCR对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-10基因进行了序列比较.结果该
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会暨第六届代表大会
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运用RT-PCR对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-10基因进行了序列比较.结果该基因全长537bp,编码178个氨基酸,其中前18个氨基酸残基构成信号肽序列.与GenBank报道的欧洲兔IL-10基因相比,核苷酸的同源性为99.63％,氨基酸的同源性为99.44％,但与鼠、鸡、河豚和斑马鱼等不同物种IL-10相比差异较大.在推导的中国白兔IL-10氨基酸序列中,在100-102和134-136位存在2个潜在的N-联糖基化位点,同时存在6个Cys残基.将pTIL-10双酶切,回收目的基因片段克隆到pET28a中构建了重组质粒pETIL-10,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为23.4 kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的15.2％.将表迭的蛋白割胶纯化后,制备了小鼠抗兔IL-10的多克隆抗体.
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