【摘 要】
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目的：通过构建2型猪链球菌(SS2)细胞分裂调控蛋白divIVA基因突变株△divIVA,研究该基因在调控细胞分裂及SS2致病性中的作用.方法：构建中间携有壮观霉素(Spc)抗性,两端为divIVA基因同源臂的敲除质粒pUC18：divIVA,将pUC18：divIVA电转入SS2感受态细胞中,利用细菌同源重组获得△divIVA突变株;比较SS2与△divIVA基本生物学特征、细胞体外实验和小鼠体
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,江苏南京210000;南京师范大学,江苏南京210046 南京军区军事医学
【出 处】
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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会
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目的：通过构建2型猪链球菌(SS2)细胞分裂调控蛋白divIVA基因突变株△divIVA,研究该基因在调控细胞分裂及SS2致病性中的作用.
方法：构建中间携有壮观霉素(Spc)抗性,两端为divIVA基因同源臂的敲除质粒pUC18：divIVA,将pUC18：divIVA电转入SS2感受态细胞中,利用细菌同源重组获得△divIVA突变株;比较SS2与△divIVA基本生物学特征、细胞体外实验和小鼠体内毒力实验差异,分析divIVA基因功能及作用.
结果：经组合PCR和组合酶切验证成功构建敲除质粒pUC18：divIVA,经PCR及测序分析成功构建△divIVA.比较SS2与△divIVA生物学特征发现,△divIVA生长速率减慢,菌落直径变小;通过显微观察发现,△divIVA细胞形态发生明显变化,细胞荚膜变薄,细胞分裂畸形,隔膜形成异常,细胞聚集形成团块等;体外细胞实验表明,△divIVA对Hep-2细胞的黏附能力增强,对小鼠巨噬细胞(Raw264.7)的抗吞噬能力减弱,对人中性粒细胞(PMNs)的抗吞噬能力减弱;动物感染实验表明,△divIVA菌株对小鼠无致病性.
结论：以上结果表明divIVA基因对SS2细胞分裂及致病性调控具有重要作用.
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