【摘 要】
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目的：建立并评估免疫性卵巢炎小鼠动物模型,观察补肾活血汤对免疫性卵巢炎小鼠血清IL-1、IL-2、TNF-α、INHB、FS、ACTA,脾脏组织CD3、CD8、Th17、Foxp3mRNA,卵巢组织病理形态学及免疫组化的影响,从细胞因子水平、激素水平、分子水平等探讨补肾活血汤防治免疫性卵巢炎的机制.方法：将70只性周期规律的B6AF1雌性小鼠参照Current Protocols in Immun
【机 构】
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南京中医药大学 南京仙林大学城仙林大道138号 210023 江苏省中医药研究院 南京红山路十字街
【出 处】
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2013全国中西医结合生殖系统炎症性疾病专题学术会议
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目的：建立并评估免疫性卵巢炎小鼠动物模型,观察补肾活血汤对免疫性卵巢炎小鼠血清IL-1、IL-2、TNF-α、INHB、FS、ACTA,脾脏组织CD3、CD8、Th17、Foxp3mRNA,卵巢组织病理形态学及免疫组化的影响,从细胞因子水平、激素水平、分子水平等探讨补肾活血汤防治免疫性卵巢炎的机制.方法：将70只性周期规律的B6AF1雌性小鼠参照Current Protocols in Immunology中Unit15.17的方法建立自身免疫性卵巢炎小鼠模型：将弗氏不完全佐剂与结核分枝杆菌(H37RA) 3∶10配制成弗氏完全佐剂(终浓度3.3mg/ml结合分枝杆菌),同等体积的弗氏完全佐剂和1mM的ZP3肽溶液充分混合,将配好的混合乳化液0.1ml分别注射到模型组(55只)小鼠一侧后脚掌掌心处皮下(＜0.05ml)及尾根(＞0.05ml).空白组(15只)同法注射双蒸水0.lml.第14天取所有小鼠阴道脱落细胞观察动情周期变化并随即取空白组5只、造模组5只的卵巢组织观察病理学变化.随机将造模小鼠分为免疫性卵巢炎模型组、补肾活血汤低(1.577g生药/ml)、中(3.154g生药/ml)、高(4.731g生药/ml)剂量组、倍美力(0.0183mg/ml)阳性对照组,及空白组(0.9％NS液)每组10只.分别灌胃0.2ml×28天,第29天处死小鼠,心脏取血并取双侧卵巢组织、脾脏组织.ELISA法测定各组小鼠外周血清IL-1、IL-2、TNF-α、INHB、FS、ACTA；流式法检测外周血清CD3、CD8、Thl7； RT-PCR测Foxp3mRNA；卵巢组织HE染色观察各组小鼠卵巢炎症情况及冰冻切片直接免疫荧光法测抗透明带抗体(AzpAb).结果：本实验制作的免疫性卵巢炎动物模型动情周期紊乱(持续处于动情期或持续处于动情间期或动情周期紊乱),自身免疫性卵巢炎的组织病理学分级与文献报导的一致(多处于i-2及,少数3级,极少4级),证明造模成功.模型组与空白组、模型组与各用药组相比,除IL-1无影响外,均可以降低IL-2、TNF-α水平；与空白组、模型组比较,各用药组均可以升高INHB、FS水平,降低ACTA水平；模型组较空白组CD3、CD8、Th17水平明显升高；各用药组外周血CD3、CD8、Th17含量明显低于模型组,中药高剂量组CD3、CD8、Thl7水平较补佳乐组明显下降,差异有统计学意义；与空白组相比,模型组、各用药组Foxp3mRNA的表达均降低(P＜0.05),尤以模型组降低的最为明显；各治疗组均可以抑制卵巢萎缩,闭锁滤泡增加,生长滤泡和黄体数减少,减少炎性细胞浸润；比较各组AzpAb荧光强度,模型组与各用药组、空白组之间存在差异(P＜0.01),而各用药组之间无明显统计学差异(p＞0.01).结论：1、以小鼠透明带3的第330-342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)为免疫原建立自身免疫性卵巢炎小鼠模型,该模型在卵巢形态学的表现与人类自身免疫性卵巢炎相似.2、补肾活血汤防治免疫性卵巢炎的取效可能与NIM网络中细胞因子、激素水平或整体调控作用有关.3、补肾活血汤可能从INHB-ACTA-FS系统防治免疫性卵巢炎的生殖内分泌紊乱.
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