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研究背景:由于近些年环境污染的加剧诱发,肺癌的发病率逐年增长,加之肺癌治疗难度大,如何精准有效的对其进行诊治,已成为亟待解决的问题。随着免疫精准治疗的发展, CAR-T细胞治疗自出现以来已发展至第四代。如今针对于血液肿瘤的靶点已取得了很多突破性的进展,而针对于实体瘤的研究却十分有限。lunX属于PLUNC家族,前期研究发现lunX mRNA可作为肺癌诊断的特异性生物标记物,它仅表达于肺癌组织,而不表达于人的正常肺组织,且lunX与非小细胞肺癌的生长和转移密切相关,所以使用lunX蛋白作为CAR-T细胞治疗肺癌的靶点具有重要的科学意义和应用价值。研究目的 :构建CARlunX T细胞用于肺癌精准免疫治疗。方法 :扩增anti-lunX的单链抗体识别区,连接CARlunX序列入慢病毒骨架质粒中,通过包装慢病毒感染人T细胞,检测T细胞的感染效率和CARlunX片段的mRNA和蛋白水平表达情况,验证CAR序列的正确性。随后通过选择高表达lunX表面分子的肺癌细胞系作为靶细胞,进行杀伤实验进行检测。结果 :为了构建精准识别lunX抗原蛋白的CARlunXT细胞,我们首先用CARlunX慢病毒骨架质粒对293T细胞进行转染并进行了表达检测,可以发现CAR序列得以成功表达。接着,为了使外周血T细胞过表达CARlunX序列,我们对T细胞进行了慢病毒感染,发现外周血T细胞的感染效率可达70%。为了选择合适的靶细胞,我们分别对肺癌细胞系进行了lunX蛋白的表达检测,结果表明N-CIH292细胞表面高表达lunX分子,从而提示我们N-CIH292可以作为合适的靶细胞,可能会有良好的杀伤效果。于是接下来我们对靶细胞进行了体外杀伤实验,相比于对照组,CARlunX-T细胞可以明显提高对于靶细胞的杀伤能力。结论 :本研究构建了针对于非小细胞肺癌细胞表面分子lunX的慢病毒表达载体,通过感染T细胞和T细胞的体外扩增,同时对高表达lunX分子的非小细胞肺癌细胞系进行筛选,在体外进行了杀伤实验验证,证明CARlunX-T可以提高对于肺癌细胞的杀伤效率。