【摘 要】
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目的 脑缺血损伤可以促进成年哺乳动物脑内VEGF表达水平升高,甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)可以通过与甲基化的DNA结合来调控基因表达,DNA脱甲基化可以诱导MeCP2从其目的基
【机 构】
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复旦大学上海医学院神经生物学系,医学神经生物学国家重点实验室,上海200032
【出 处】
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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五届会员代表大会
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目的 脑缺血损伤可以促进成年哺乳动物脑内VEGF表达水平升高,甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)可以通过与甲基化的DNA结合来调控基因表达,DNA脱甲基化可以诱导MeCP2从其目的基因序列释放,从而促进该基因的表达.本实验的目的是为了揭示DNA甲基化及其与MeCP2的相互作用在脑缺血诱导的VEGF高表达过程中的调控机制.方法 我们在进行短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)后的大鼠腹腔注射5-AZA-2-脱氧胞苷(5-AZA-CdR)以降低基因组DNA的甲基化水平,采用Western-Blot技术检测相关蛋白的表达水平,染色质免疫共沉淀(ChIP)方法直接分析MeCP2对VEGF基因的调控作用,甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技术检测VEGF基因启动子的甲基化水平.结果 (1)缺血损伤可以诱导脑内VEGF表达水平升高,于缺血再灌3天后达到高峰；(2)腹腔注射5-AZA-CdR后可以进一步增加VEGF的蛋白表达水平,与注射生理盐水组比较,含量升高1.5倍以上；(3)缺血后MeCP2与VEGF基因启动子序列的相互作用降低,5-AZA-CdR处理可以进一步减弱二者的结合力；(4)甲基化水平分析发现,缺血后VEGF启动子序列的甲基化水平降低,5-AZA-CdR处理可以进一步降低该序列的甲基化水平.结论 脑缺血损伤后,VEGF启动子调控序列的甲基化水平降低,促使MeCP2从该序列上的解离,二者共同参与了缺血诱导的VEGF表达上调过程.
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