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禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum Schwabe)是引起中国小麦赤霉病的主要病原菌,多菌灵是防治该病害的主要药剂之一. 本研究将田间高抗菌株JT-04 (EC50=7.62μg/ml)的β1、β2-微管蛋白基因分别敲除，测定各敲除突变体菌株的多菌灵敏感性，结果发现敲除β2-微管蛋白基因的突变体菌株DNJ-210对多菌灵超敏感(EC50=0.071），并且与野生菌株2021(EC50=0.56μg/ml)β2-微管蛋白基因敲除突变体菌株DN2-212对多菌灵的敏感性(EC50=0.10μg/ml )一致;而敲除β1-微管蛋白基因的突变体菌株DBJ-135对多菌灵超高抗(EC50=343.71μg/ml)。同时用绿色荧光蛋白GFP分别标记JT-04菌株的两个β-微管蛋白，获得原位标记β1-微管蛋白基因的菌株FBJ-531和原位标记2-微管蛋白基因的菌株FNJ-539，通过荧光显微观察两菌株在不同药剂浓度下被标记的β-微管蛋白组装形成的微管的形态。菌株FBJ-531在多菌灵0.5μg/ml处理条件下观察到的微管基本解聚，在1.0μg/ml条件下无成形的微管(胞质微管或纺锤体)可见;这与荧光观察GFP标记野生菌株2021的β1-微管蛋白的菌株FB2-325的结果一致。而FNJ-539在多菌灵浓度为10μg/ml处理条件下，其细胞内仍可见正常成形的微管，在浓度增加到100μg/ml时，其细胞内绿色荧光散乱，再无成形的微管可见。以上结果说明田间抗性菌株JT04的β1、β2-微管蛋白对多菌灵的敏感性差异，其β1-微管蛋白与野生菌株相当，β1微管蛋白相当，但β2-微管蛋白比野生菌株的β1微管蛋白对多菌灵的敏感性大大降低，即证实田间抗性菌株JT04对多菌灵的抗性是由于β2-微管蛋白的突变引起的。另外，分别用4种禾谷镰抱菌多菌灵抗性突变方式的田间抗性菌株(ZF-52,EC50=5.36μg/ml，MIC=100μg/ml;NT-7，EC50=4.48μg/ml，MIC=100μg/ml;JT-04，EC50=7.62μg/ml, MIC＞200μg/ml;J2,EC50=4.89μg/ml, MIC＞200μg/ml)的β2-微管蛋白基因片段来恢复野生菌株β2-微管蛋白基因敲除突变体菌株DN2-212(EC50=0.10μg/ml)，分别获得该4种恢复突变体CNZF-28,CNNT-13 ,CNJT-35,CNJ2-41，并测定此4种恢复突变体菌株对多菌灵的敏感性，结果为CNZF-28;EC50=4. 43μg/ml,MIC=100μg/ml; CNNT-13:EC50=5.53μg/ml，MIC=100μg/ml;CNJT-35:EC50=8.25μg/ml，MIC＞200μg/ml;CNJ2-41;EC50=5.42μg/ml,MIC＞200μg/ml。由此直接证实了禾谷镰抱菌β2-微管蛋白基因的4种点突变方式导致病原菌对多菌灵的不同抗性水平。