论文部分内容阅读
目的：本研究是观察38GAP单用及与顺铂(CDDP)联用的抗肿瘤活性与作用机制，进一步探讨G3BP作为一个新的肿瘤治疗靶点的可能性.为研究新的特异靶向性抗肿瘤新药提供理论和实验依据。方法：采用台盼蓝拒染法检测38GAP单用以及与CDDP联用对结肠癌HCT-116细胞的增殖抑制作用.PI单染法分析细胞周期阴断，用hoechst33258荧光染色法、流式细胞术和丁UNEL染色法检测细胞凋亡。Western blot去检测凋亡信号通路相关蛋白的表达，同时检测38GAP单用及与CDDP联用后细胞信号通路中相关蛋白的表达变化，来探讨38GAP对化疗药物增敏的机制.建立小鼠结肠癌CT26肿瘤模型，观察38GAP单独及与CDDP联用对小鼠结肠癌26肿瘤生长的抑制作用。结果：台盼蓝拒染法显示38GAP能够抑制HCT-116细胞的增殖，与CDDP联用后能够显著增强杀伤细胞的能力，20NM和30NM的38GAP单独作用48h的抑制率分别为38.5%, 48.7%.lONM CDDP单独作用的抑制率为29.6%，两者联合用药的抑制率分别为79.1%, 85.9%，两药联合指数分别为0.56, 0.46，具有显著的协同作用。38GAP能够逆转CDDP引起的G2/M期阻滞，使得G2/M期细胞减少，阻止肿瘤细胞的DNA损伤修复。38GAP作用后细胞开始变圆、皱缩和染色质凝集，形成凋亡小体等形态学改变.随着38GAP浓度的增加亚G1期细胞增多，与CDDP联用后亚G1期细胞显著增加.TUNE以检测结果显示，20NM和30NM 38GAP作用HCT-116细恻8h后凋亡率分别为16.9%, 24.2%，lONM CDDP的凋亡率为2.3%：两药联合后的凋亡率分别为24.4%, 46.4%,Western blot果显示38GAP与CDDP联用后caspase3和caspase7活性增加，PARP剪切体增加.Western blot结果显示38GAP单独作用对aKr阳ERK活性具有一定的抑制作用，并且能够显著的下调NF-KB，与CDDP连用后能够抑制CDDP弓}起的ERK和N F-KB异常激活，从而起到对化疗药物的增敏作用.体内研究结果显示，38GAP单用及与CDDP联合用药小鼠结肠癌26呈剂里依赖性肿瘤生长抑制作用.25 mg/kg, 50mg/kg和100 mg/kg的38GAP与1 mg/kg的CDDP联合用药均有不同程度的抑瘤作用.100 mg/kg 38GAP和1 mg/kg CDDP单独用药的抑瘤率分别为23%和38%，而联合用药的抑瘤率为60%(P<0.01)‘两药联合指数(a)为0.84，具有显著的协同作用。结论：38GAP对结肠癌HCT-116细胞具有一定的生长抑制作用，与CDDP联用后能够显著提高肿瘤细胞对于化疗药物的敏感性，诱导细胞凋亡的增加.38GAP的这种增敏作用主要通过抑制AKT扣ERK的激活，以及下调NF-KB从而阻断下游促细胞增殖信号通路而发挥抗肿瘤作用.体内实验表明38GAP单独或者与CDDP联合用药对小鼠结肠癌26显示剂量依赖性生长抑制作用。本研究提示，38GAP可能成为一个新的抗肿瘤靶向药物。