抗ALT单克隆抗体制备中杂交瘤筛选体系的建立

• 作 者: 樊晶 刘娜 袁玉华 张孝山 巩玉凤 董雪
• 机 构: 天津市血液中心300110天津医科大学300070
• 出 处: 2010年华北地区输血协作组工作会议
• 发表日期: 2010年5期
• 关键词: 丙氨酸氨基转移酶 单克隆抗体 间接ELISA 杂交瘤筛选体系 抗体效价

目的:建立免疫小鼠体内抗人丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体效价的间接ELISA检测方法，评价免疫效果，将其作为融合后杂交瘤细胞株的筛选体系。
方法:利用人丙氨酸氨基转移酶(ALT)作为包被抗原，采用棋盘滴定法确定抗原和对照血清(阴性、阳性)最佳工作浓度，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG作为酶标二抗。以阳性血清OD450值-空白对照OD450值/阴性血清OD450值-空白对照OD450值比值最大者为最佳工作浓度的判断标准。
结果:包被抗原、阴性、阳性血清浓度分别为：l：5000，1：1000，1：1000,酶标二抗浓度为1：40000。
结论:该方法稳定简便易行，提高了筛选效率，并能准确检测免疫小鼠体内产生抗体的效价，为准备融合提供了时间依据。