【摘 要】
：
目的：探讨异体GVAX瘤苗规模化制备以及在晚期肺癌临床应用的安全性初步评价.方法：实验于2010年5月至2011年2月在解放军第二五四医院生物诊疗中心完成.在GMP实验室的条件下,腺病毒载体规模化生产通过将293细胞逐级放大,最后在4～5个10层细胞工厂加入腺病毒毒种、氯化铯梯度离心、层析纯化等步骤获得腺病毒载体.用肺癌A549细胞株制备异体GVAX瘤苗,细胞培养过程类似293细胞,最后在4～5个
【机 构】
：
山西医学科学院山西大医院肿瘤内科,生物治疗科 030031 北京军区总医院生物治疗科 100007
【出 处】
：
2012年全国肿瘤分子标志学术大会与国际肿瘤转化医学论坛暨第七届中国中青年肿瘤专家论坛
论文部分内容阅读
目的：探讨异体GVAX瘤苗规模化制备以及在晚期肺癌临床应用的安全性初步评价.方法：实验于2010年5月至2011年2月在解放军第二五四医院生物诊疗中心完成.在GMP实验室的条件下,腺病毒载体规模化生产通过将293细胞逐级放大,最后在4～5个10层细胞工厂加入腺病毒毒种、氯化铯梯度离心、层析纯化等步骤获得腺病毒载体.用肺癌A549细胞株制备异体GVAX瘤苗,细胞培养过程类似293细胞,最后在4～5个10层细胞工厂感染腺病毒载体Ad hGM-CSF/IL-2和AdhCD40L,收集细胞经10000拉德射线照射,分装成每支2×107细胞/分装后液氮保存.并实施腺病毒载体的感染效率、细胞因子分泌、成瘤性、内毒素和病原学等检测.在此基础上,选择经病理确诊、经常规治疗无效或已无法实施常规治疗的晚期非小细胞肺癌患者10例,患者在接受疫苗治疗前一月未接受手术、化疗或放疗以及免疫基因治疗.患者或家属签署知情同意书后给予异体GVAX瘤苗治疗,GVAX瘤苗复苏后即刻进行注射,每次皮内注射多点注射,注射部位为淋巴回流丰富的部位,如肱三头肌、腹股沟区,每一部位0.2～0.3 ml,1次/周,共6次.治疗期间详细记录注射部位反应情况及全身反应情况,并采用美国NCI制定的不良反应/事件分级(CTCAE)监测患者的不良反应.结果：在GMP条件下,采用逐级放大、细胞工厂培养293细胞后生产腺病毒载体,经氯化铯梯度离心、层析纯化等步骤可获得大量高纯度的腺病毒载体,一次生产和获得4～8×1011pfu的病毒量,用类似的方法培养A549细胞,4～5个10层的细胞工厂可获得1～2×109个细胞.腺病毒载体对Ad549细胞的感染效率为91.2％,GM-CSF和IL-2的分泌量为1680±358 ng/24 h/1×106和644±102 ng/24 h/1×106.成瘤性、内毒素、病原学检测均阴性.对10例肺癌患者临床应用的安全性,GVAX瘤苗治疗期间患者主要的不良反应是轻至中度的流感样症状和注射局部的不适症状,包括2/10例发热,体温均在低于38.5℃,3/10例出现乏力,1/10例出现疲劳,4/10例出现全身肌肉酸痛,3/10例出现注射部位局部瘙痒,1/10例出现红肿硬结.10例患者瘤苗接种期间未见相关的心、肝、肾等重要器官的功能损害.治疗结束后2周后评价患者生活质量,KPS评分较治疗前升高的患者有4例.结论：在GMP条件下,通过逐级放大培养,最后在多个细胞工厂中扩增腺病毒载体和肿瘤细胞,均可获得较大的产量,制备的异体GVAX瘤苗经严格质检无成瘤性、内毒素和病原学检测阴性.此类异体GVAX瘤苗应用于晚期肺癌患者具有良好的安全性,所引起的毒副反应多为轻、中度的流感样症状和注射局部的不适反应,患者均能耐受.
其他文献
Background MicroRNAs (miRNAs) are a class of small RNAs that function as negative gene regulators through binding to complementary sequences in the 3 UTR of target mRNA.MicroRNA-21(miR-21) has been su
Pancreatic cancer is the fourth leading cause of cancer-related death and the mortality rate remains very high.Despite efforts in the past 50 years, conventional treatment approaches, such as surgery,
Background Decreased expression of adiponectin (ADIPOQ) is associated with an increased risk for developing colorectal cancer (CRC) in humans.This study was designed to determine whether polymorphisms
Objectives IGF1 has been implicated in processes leading to breast cancer initiation and progression.A CA repeat polymorphism in the promoter region may suppress transcriptional activity and be associ
Background: Human globular heads of C1q receptor (gC1qR) is a conserved eukaryotic protein that localizes predominantly in the mitochondrial matrix.The list of biologic response mediated by gClqR is i
目的：比较肝癌手术患者肝癌组织与癌旁组织低丰度线粒体蛋白质表达谱的改变,筛查肝癌相关线粒体蛋白质分子标志物并探讨可能机制。方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF/SDS-PAGE)建立20例肝癌切除患者肝癌组织与癌旁组织线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。对其中三个
Molecular targeted therapy in metastatic tumors is rising worldwide.The therapeutic strategy to target the selected EGFR has been developed in clinical trial.However, it shows severe adverse effects i
目的：探讨脂联素对人乳腺癌细胞T47D细胞周期以及凋亡所产生的影响,以及血清脂联素水平与乳腺癌发生风险之间的关系及发生中的作用.方法：选择山西省肿瘤医院乳腺外科2009年1月到2010年1月收治的术前女性乳腺癌原发病例100例,按照频数匹配的方法选择病人陪侍100例作为对照组,进行血清学检测.对数生长期的乳腺癌细胞T47D细胞系,检测0,500ng/ml,2000 ng/ml脂联素对其细胞周期及凋
Objectives: To get more understanding of the molecular mechanisms underlying gastric cancer, twenty-five paired samples were applied to gene expression microarray analysis.Methods: We applied laser ca