【摘 要】
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目的 构建小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体,进一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制.方法 (1)两步PCR法合成针对小鼠SCP2基因shRNA,并连接到质粒PDC312上;(2)采用Ad
【出 处】
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中华医学会2012年第十三届中华肝胆胰脾外科专业学术论坛
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目的 构建小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体,进一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制.方法 (1)两步PCR法合成针对小鼠SCP2基因shRNA,并连接到质粒PDC312上;(2)采用AdMax TM Adenoviru5 Vector系统包装病毒,CsCl法纯化病毒、TCID50法测定滴度;(3) SYBR Green荧光实时定量PCR检测重组腺病毒在小鼠hepa-1-6细胞中SCP2mRNA的表达.结果 构建的重组腺病毒载体使SCP2mRNA在小鼠hepa-1-6细胞系中的表达下调;Adsh1RNA、Adsh2RNA与AdsshRNA组相比P<0.05,差异有统计学意义;且二者对SCP2 mRNA的抑制率分别为83.5%和71.6%,Adsh1RNA的抑制效果更好.结论 成功构建小鼠SCP2基因的shRNA重组腺病毒载体,有助于下一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制的关系.
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