鸭MHC—Ⅰα链胞外区成熟肽基因克隆、序列分析及其表达载体的构建

• 作 者: 孙凯;李新生;崔保安;陈红英;魏战勇;张蕾;宋亚鹏;阮武营;
• 机 构: 河南农业大学牧医工程学院 河南郑州 450002 河南省动物性食品安全重点实验室 河南郑州 450002
• 出 处: 中国畜牧兽医学会2009学术年会
• 发表日期: 2009年期

目的：克隆鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因cDNA序列，构建并鉴定其原核表达质粒pET/Du MHC—I.
方法：从GenBank/DDBJ/EMBL基因库中读取鸭MHC—I基因进行序列分析并设计1对引物，使用RT—PCR法从鸳鸯鸭脾脏组织中扩增MHC—I α链胞外区成熟肽基因cDNA,T—A克隆到pGEM—TEasy载体中。将该基因片段亚克隆入pET-28a(+)载体，构建重组表达质粒pET/Du MHC-I。
结果：测序结果表明，获得了MHC—I α链胞外区成熟肽基因，其大小为813 bp，编码271个氨基酸。与GenBank中登录的鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因序列的同源性为89.4[％]—91.7[％]，氨基酸同源性为78.2[％]-83.7[％]。与GenBank上已登录的鸡、鹅、鹌鹑、草鱼、狗、猪、鼠和人的MHC—I α链胞外区成熟肽氨基酸序列的同源性分别为64.6[％]、79.3[％]、59.4[％]、41.0[％]、26.6[％]、45.0[％]、12.5[％]和22.1[％]，这表明MHC—I α链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性，且亲缘关系越近，同源性越高。所获重组表达质粒pET/Du MHC—I经PCR、酶切、测序鉴定，证实鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因Cdna正确克隆入pET-28a(+)表达载体。
结论：成功克隆出鸭MHC—I α链胞外区成熟肽基因，并构建重组表达质粒pET/Du MHc-I，为进一步研究鸭MHC—I蛋白表达，重组蛋白活性鉴定及其在抗原识别和免疫应答中的作用奠定基础。