利用干涉RNA技术对MAG-1基因功能的研究

来源 :中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会成立大会暨第一届临床应用生物化学与分子生物学学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuxc1112
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目的: MAG-1为我室利用抑制消减杂交技术和基因芯片技术从人肺巨细胞癌高低转移株95-D、C中发现的与转移相关的基因.经NCBI的gene bank比对与MGC11324同源,但文献检索并未检索到研究其功能的文献.RNA干涉是与特定基因同源互补的双链RNA在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解,从而导致转录后基因沉默的过程.由于其操作简单,作用迅速,较高特异性,首先应用于反向遗传学和基因功能的研究. 方法: 为研究MAG-1的功能,我们构建用于细胞内转录靶向MAG-1基因的短发夹状RNA的siRNA表达载体pSilencer2.1U6 neo(Ambion),并转染细胞后,筛到稳定表达株,以RT-PCR和WESTERN-BLOT分析对基因的表达的抑制情况.通过研究转染后细胞增殖能力、黏附能力以及迁移能力的变化,探讨MAG-1与肿瘤转移的相关性. 结果: 与转染阴性对照质粒细胞相比,转染表达siRNA重组质粒的细胞其基因表达水平显著下降:细胞的增殖减慢,黏附能力下降, 结论: MAG-1是可能抑制肺癌细胞的转移基因.
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