新疆出血热病毒多表位基因原核表达及间接ELISA方法的建立

• 作 者: 俞欢 雒涛 常晨晨 李阳 邓菲 张渝疆 孙素荣
• 机 构: 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046新疆疾病预防控制中心中国科学院武汉病毒研究所
• 出 处: 新疆动物学会2016年学术研讨会暨第七届青年学术论坛
• 发表日期: 2016年9期
• 关键词: 新疆出血热病毒 多表位肽 原核表达 间接ELISA

　　[目的]原核表达纯化新疆出血热病毒(XHFV)YL04057 株的多表位肽,以其为抗原建立检测动物血清抗XHFV 抗体的间接ELISA 方法。[方法]依照对XHFV YL04057 株核蛋白和糖蛋白氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析,设计包含有保守性强的共6 个优势B细胞表位的多表位基因片段,经串联重复成为双拷贝多表位基因MEPX2,采用化学法合成后构建原核表达质粒pET-32a(+)-MEPX2,经诱导表达和镍柱亲和层析纯化获得重组rMEPX2 多表位肽,Western Blot 检测其抗原性,以其作为包被抗原采用方阵滴定法建立间接ELISA 方法检测动物血清,并与商品化试剂盒检测结果进行比较。[结果]经双酶切鉴定和测序证实构建的重组表达质粒pET-32a(+)-MEPX2 正确,经SDS-PAGE 分析和Western blot 鉴定证实rMEPX2 表达正确,约为49 kD,能被His-tag 单抗及天然感染XHFV 的羊血清特异性识别。以纯化的rMEPX2 为抗原建立了检测XHFV IgG 抗体的间接ELISA 方法,用此法对108 份绵羊血清样品进行检测,并与双抗原夹心法商品化试剂盒检测比较,结果显示基于rMEPX2 建立的检测方法具有较高的特异性。[结论]成功获得抗原性强的重组多表位肽rMEPX2,以其为抗原建立的间接ELISA 方法可用于XHFV 特异性抗体的检测。